西瓜甜瓜蔓枯病病菌差异性初步研究-《中国瓜菜》(2012年6期).docx

龙源版权所有 西瓜甜瓜蔓枯病病菌差异性初步研究作者：胡凤云　莫贱友　韦继光　郭堂勋　黄穗萍　潘朝勃来源：《中国瓜菜》2012年第06期 摘 要： 初步研究了西、甜瓜蔓枯病病菌差异性，为深入了解西、甜瓜蔓枯病病原提供理论依据。采用离体叶片接种法对19个西、甜瓜蔓枯病菌株进行致病力差异性研究，并对不同菌株核糖体基因内转录区序列（rDNA-ITS）比较分析。结果发现：不同西、甜瓜蔓枯病菌株致病力存在显著性差异，病情指数为85.11～4.58；但不同菌株间的ITS序列比较差别不大，保守程度高，菌株间的分化和变异不明显。 关键词： 西瓜； 甜瓜； 蔓枯病； 病菌差异性 西、甜瓜蔓枯病（Didymella bryoniae）是一种真菌性土传病害，危害植株茎基部和节间部。由于受保护地特殊生态环境条件以及广西地区常年高温高湿气候的影响，近年来广西西瓜和甜瓜病害发生种类日益增多，数量越来越大，危害程度越来越严重，严重影响了西、甜瓜的产量和品质，给瓜农造成了很大的经济损失。其中，蔓枯病就是西、甜瓜的重要病害之一。据笔者近几年的调查，在南宁市郊区各西、甜瓜种植基地蔓枯病危害也有加重的趋势，武鸣县武帽农场保护地种植瓜类每年种植二、三茬，由于同类作物不断连作，造成菌源大量积累，同一大棚内春季蔓枯病发病率为20%～30%，秋季发病率在80%～100%，损失在 40% 以上。因此深入研究西、甜瓜蔓枯病病菌差异性，对西、甜瓜蔓枯病防治具有十分重要的现实意义。 1995年Amand等[1]研究了8个蔓枯病菌株对不同葫芦科作物的致病力，结果显示基本无差异。2008年吴海波等[2]研究了来自江苏和海南的4个蔓枯病菌株的致病力，结果显示差异不显著。江蛟[3]比较了4个蔓枯病菌株的ITS序列，结果发现菌株之间遗传多样性不明显。本研究即利用离体叶片接种法对西、甜瓜蔓枯病菌株进行致病力差异性研究，并对19个西、甜瓜蔓枯病菌株的ITS序列进行比较分析，以期了解西、甜瓜蔓枯病病菌差异性，不同菌株之间是否存在分化和变异，为深入研究西、甜瓜蔓枯病病原提供理论依据。 1 材料与方法 1.1 试验材料 病原菌来源：采自广西壮族自治区南宁市郊西、甜瓜各种植区及柳州、北海、桂林等地具有典型蔓枯病症状的西瓜和甜瓜病株样本，经分离、纯化获得。 1.2 试验方法 1.2.1 不同菌株对同一西瓜品种致病力差异研究 在张永兵等[4]的方法基础上稍做改进。试验于2011年9-11月在广西农业科学院植物保护研究所科研基地及真菌研究室进行。将西瓜种子（西农8号）消毒、播种，出苗后长至3～5片真叶时，取其第3～5 片展开的幼叶，用灭菌蒸馏水冲洗干净后，晾干叶片表面水分，用软毛笔将配制好的孢子悬浮溶液（5×105个·mL-1）接种至叶片上，然后将其置于灭过菌铺有湿滤纸的培养皿中，另设内含不接种病菌只接灭菌蒸馏水叶片的培养皿为对照；在 25 ℃ 条件下进行培养，光照周期为16 h光照/ 8 h 黑暗，相对湿度约90 %。每个处理3片叶，重复3 次。 接种培养3～4 d后，按以下分级标准进行病情级数调查，并计算出病情指数。0级，叶片未发病；1级，叶片发病面积在10% 以下；3级，叶片发病面积 10%～25%；5级，叶片发病面积 26%～50%；7级，叶片发病面积 51%～75%；9级，叶片发病面积 76%～100%。 病情指数按以下公式计算： 1.2.2 不同菌株核糖体基因内转录区序列（rDNA-ITS）比较 1.2.2.1 蔓枯病菌菌丝的收集 将不同采样地点（南宁郊区以及柳州、桂林、北海等地）的19株蔓枯病菌接种于PSA培养基上培养4 d后，接入PD液体培养基中，振荡培养（25 ℃，80 r·min-1）4～7 d，用灭菌纱布过滤后，用无菌水冲洗2～3次，用滤纸吸干水分，冷冻干燥，低温保存备用。 1.2.2.2 蔓···试读结束