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缓冲液如何配制 缓冲液是一种能在加入少量酸或碱时抵抗pH改变的溶液。PH缓冲系统对维持生物的正常 pH值，正常生理环境起重要作用。多数细胞仅能在很窄的pH范围内进行活动，而且需要 有缓冲体系来抵抗在代谢过程中出现的pH变化。在生物体中有三种主要的pH缓冲体系，它们时蛋白质、重碳酸盐缓冲体系。每种缓冲体系所占的分量在各类细胞和器官中是不同的。 在生化研究工作中，常常要用到缓冲溶液来维持实验体系的酸碱度。研究工作的溶液体 系pH值的变化往往直接影响到我们工作的成效。如果提取酶实验体系的pH值变化或变化过大，会使酶活性下降甚至完全失活。所以我们要学会配制缓冲溶液。 由弱酸及其盐组合一起使具有缓冲作用。生化实验室常常用的缓冲系主要有磷酸、柠檬 酸、碳酸、醋酸、巴比妥酸、Tiris（三羟甲基氨基甲烷）等系统，在生化实验或研究工作中 要慎重地选择缓冲体系，因为有时影响实验结果的因素并不是缓冲液的pH值，而是缓冲液中的某种离子。如硼酸盐、柠檬酸盐、磷酸盐和三羟甲基甲烷等缓冲剂都可能产生不需要的 反应。 硼酸盐：硼酸盐与许多化合物形成复盐、如蔗糖。 柠檬酸盐：柠檬酸盐离子容易与钙结合，所以存在有钙离子的情况下不能使用。 磷酸盐：在有些实验，它是酶的抑止剂或甚至是一个代谢物，重金属易以磷酸盐的形式 从溶液中沉淀出来。而且它在pH7.5以上时缓冲能力很小。 三羟甲基氨基甲烷：它可以和重金属一起作用，但在有些系统中也起抑止的作用。其主 要缺点时温度效应。这点往往被忽视，在室温pH是7.8的Tris一缓冲液，在4?时是8.4，在37?时是7.4，因此，4?配制的缓冲液拿到37?测量时，其氢离子浓度就增加了10倍。而且它在pH7.5以下，缓冲能力很差。 缓冲液的pH值由哪些因素决定？ 设缓冲系统的弱酸的电离常数为K（平衡常数），平衡时弱酸的浓度为[酸]，弱酸盐的浓度为[盐]，则由弱酸的电离平衡式可得下式： 根据此式可得出下列几点结论： （1）缓冲液的pH值与该酸的电离平衡常数K及盐和酸的浓度有关。弱酸一定，但酸和盐 的比例不同时，可以得到不同的pH值。当酸和盐浓度相等时，溶液的pH值与PK值相同。 （2）酸和盐浓度等比例也增减时，溶液的pH值不便。 （3）酸和盐浓度相等时，缓冲液的缓冲效率为最高，比例相差越大，缓冲效率越低，一般 地说缓冲液有效缓冲范围为PK?1pH。 从上述可知，只要知道缓冲对的PK值，和要配制的缓冲液的pH值（及要求的缓冲液总 浓度）时，可按公式计算出[盐]和[酸]的量。这样算涉及到对数的换算，较麻烦，前人为减 少后人的计算麻烦，经计算已为我们总结出pH值与缓冲液对离子用量的关系列出了表格。 讲义附录部分节录有磷酸缓冲液的配制表。只要我们知道要配制的缓冲液的pH，经查表便可计算处所用缓冲剂的比例和用量。例如配制500nmpH5.8浓度为0.1M磷酸缓冲液。 经查表知pH5.8浓度为0.2M NaHPO8.0毫升，而0.2M NaHPO92.0毫升。依此可推2424 论出配制100ml0.1M的磷酸缓冲液需要0.1M NaHPO8.0毫升，而0.1M NaHPO需要2424 92.0毫升。 所以500ml 0.1M磷酸缓冲液需要NaHPO量为: 24 需NaHPO量为 : 24 计算好后，按计算结果称好药品，放于烧杯中，加少量蒸馏水溶解，转移入50ml容量瓶，加蒸馏水至刻度，摇匀，便得所需的缓冲液。 各种缓冲溶液的配制，均按下表按比例混合，某些试剂，必须标定配成准确的浓度才能 进行，如醋酸、NaOH等。 可以参照无机化学教材中计算缓冲体系的方法进行计算,需要共轭酸碱的量,然后进行配置.当然,最好用实验的方法进行验证. 缓冲溶液是由弱酸及其盐或弱碱及其盐组成。对于由弱酸及其盐组成的缓冲体系，其pH值可用下式表示： pH=pKa+lg([盐]/[酸]) M/S M/S M/S M/S M/S M/S PH PH PH 醋酸钠 醋酸 醋酸钠 醋酸 醋酸钠 醋酸 (毫升数) (毫升数) (毫升数) (毫升数) (毫升数) (毫升数) 3.2 1 32 3.4 1 16 4.4 9.4 12.6 5.4 17.1 2.9 3.6 1.5 18.5 4.6 9.8 10.2 5.6 18.1 1.9 3.8 2.4 17.6 4.8 12.0 8.0 5.9 19 1 4.0 3.6 16.4 5.0 14.1 5.9 6.2 19.9 0.1 4.2 5.3 14.7 5.2 15.8 4.2 HPO溶液（11.876克纯的NaHPO?2HO溶于1升蒸馏水中）及1/15M的KHPO2424224溶液（将9.078克KHPO溶于1升水中）将着两种溶液依不同比例混合。 24 1/15M的Na HPO KHP