根癌农杆菌介导的植物基因遗传转化技术.ppt

根癌农杆菌介导的植物基因遗传转化技术;常用的植物基因转化技术;若干主要的植物细胞转化方法的比较;若干主要的植物细胞转化方法的比较;与植物基因转化有关的农杆菌;根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens);Ti质粒;;Ti质粒介导转化的过程;整个过程大致可分为以下几个步骤;;植物表达载体构建—Onc卸甲载体（受体Ti质粒）的构建;改造后的Ti质粒的基本结构;植物表达载体构建—中间载体的构建;植物表达载体构建—共整合载体系统(cointegrate vector system) ;Ampr;pLGVneo1103;植物表达载体构建—双元载体系统(binary vector system);双元载体杆菌与共整合载体所不同的是，它不依赖两个质粒之间的同源序列，不需要共整合过程就能在农杆菌内独立复制，从大肠杆菌转移到农的频率比共整合质粒的转移频率高10000倍。且改造的Ti质粒时其多克隆位点无导入pBR322质粒的同源片段。 ;;三亲交配法（triparental mating ）;Ti 质粒介导的转移转化方法;叶盘转化法;叶盘转化法;原生质体共培养转化法;整株感染法;根癌农杆菌介导转化植株的基本程序;转基因植株的检测;转基因植物的应用 一、转基因植物在植物分子生物学研究中的应用 1、转座子标签法 玉米的Ac/Ds、En/Spm和金鱼草的Tam转座子系统 ;2、T-DNA标签法 3、反义RNA技术 4、位点特异性重组技术 二、改良植物品种 1、抗虫转基因植物 2、抗病转基因植物 3、抗除草剂转基因植物 4、抗逆境转基因植物 5、改良营养品质转基因植物 6、转基因“工程三系” 7、改变花形花色的转基因植物 ;三、转基因植物作为生物反应器 优点：安全、廉价、高效、规模化 1、转基因植物生产疫苗 1990年Curtiss等人利用转基因烟草表达链球菌表面蛋白抗原A，用该转基因烟草饲喂小鼠，能引起免疫反应。 植物表达系统生产疫苗的特点： ①成本低廉； ②免疫活性高； ③安全性好； ④易于贮存和运输； ⑤使用方便。 包括：稳定表达系统、暂态表达系统 ;;2、转基因植物生产抗体 1989年Haiti获得分别表达抗体重链和轻链的转基因烟草植株，杂交后在杂种中获得了与抗原结合的抗体。 迄今，不同类型的完整抗体如IgG1、IgM、IgA、 Fab抗体、 IgG1/IgA嵌合抗体、单链抗体(scFv)和单域抗体(VH)等基因都先后转入烟草、拟南芥、伞藻和大豆等作物中，并得到表达。 3、转基因植物生产其他多肽类药物 1988年比利时PGS公司首次利用转基因烟草生产神经肽。 ;根癌农杆菌介导的植物基因遗传转化技术;常用的植物基因转化技术;若干主要的植物细胞转化方法的比较;若干主要的植物细胞转化方法的比较;与植物基因转化有关的农杆菌;根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens);Ti质粒;;Ti质粒介导转化的过程;整个过程大致可分为以下几个步骤;;植物表达载体构建—Onc卸甲载体（受体Ti质粒）的构建;改造后的Ti质粒的基本结构;植物表达载体构建—中间载体的构建;植物表达载体构建—共整合载体系统(cointegrate vector system) ;Ampr;pLGVneo1103;植物表达载体构建—双元载体系统(binary vector system);双元载体杆菌与共整合载体所不同的是，它不依赖两个质粒之间的同源序列，不需要共整合过程就能在农杆菌内独立复制，从大肠杆菌转移到农的频率比共整合质粒的转移频率高10000倍。且改造的Ti质粒时其多克隆位点无导入pBR322质粒的同源片段。 ;;三亲交配法（triparental mating ）;Ti 质粒介导的转移转化方法;叶盘转化法;叶盘转化法;原生质体共培养转化法;整株感染法;根癌农杆菌介导转化植株的基本程序;转基因植株的检测;转基因植物的应用 一、转基因植物在植物分子生物学研究中的应用 1、转座子标签法 玉米的Ac/Ds、En/Spm和金鱼草的Tam转座子系统 ;2、T-DNA标签法 3、反义RNA技术 4、位点特异性重组技术 二、改良植物品种 1、抗虫转基因植物 2、抗病转基因植物 3、抗除草剂转基因植物 4、抗逆境转基因植物 5、改良营养品质转基因植物 6、转基因“工程三系” 7、改变花形花色的转基因植物 ;三、转基因植物作为生物反应器 优点：安全、廉价、高效、规模化 1、转基因植物生产疫苗 1990年Cu