裸鼠皮下成瘤实验报告.pdf

裸鼠皮下成瘤实验报告 一、实验材料 1. 实验动物 SPF 级，雄性，6～8 周龄，裸鼠60 只，购自常州卡文斯实验动物有限公司， 实验动物许可证号：SCXK （苏）2016-0010 。所有实验动物适应性饲养一周后开 始正式实验。 2. 细胞株 6 骨肉瘤细胞（武汉普诺赛，CL-0157，1×10 cells/T25 培养瓶） 骨肉瘤耐药细胞（自行诱导培养） 3. 主要试剂 MEM 培养基（武汉普诺赛，PM150410/500 ml ） DMEM 培养基（武汉普诺赛，PM150210/500 ml ） FBS （武汉普诺赛，164210-500/100 ml ） 青霉素-链霉素溶液（武汉普诺赛，PB180120 ） 胰酶（美国Hyclone ，SH30042.01/100 ml ） PBS （南京生兴生物，SN331） 生理盐水（0.9%氯化钠注射液，安徽双鹤药业有限责任公司） 顺铂（CDDP，大连美仑生物公司，MB1055 ） 4. 主要实验仪器 超净工作台（苏净集团安泰公司，SW-CJ-1F） 高压灭菌锅（西安仪创公司，BXM-30R ） CO2 培养箱（美国ThermoFisher 公司，3131 ） 游标卡尺（海宁上匠工具有限公司，SJ-455515） 普通电子天平（常熟市双杰测试仪器厂，T1000 ） 公司总部地址：南京市江北新区生物药谷中丹园A 座2007 室；邮编：210042 ；电话：025 二、实验方法 1. 制备细胞悬液 （1）将骨肉瘤细胞培养在MEM 培养基中，含20%胎牛血清、100 U/ml 的 青霉素、100 μg/ml 的链霉素，培养在37℃含5% CO2 的细胞培养箱中。 （2 ）将长到培养皿80%～90%的细胞用胰酶消化下来，1000 rpm 离心，去 除上清，加入PBS 将细胞洗一遍，再次加入PBS 重悬，对细胞进行计数，将数 量调整为2×106 cells/ml 。 （3 ）根据裸鼠数量，制备足量的细胞悬浮液待接种裸鼠时使用。制备好的 细胞悬液于4℃冰箱保存并尽快接种裸鼠，放置时间过长影响细胞活性。 2. 建立裸鼠皮下成瘤模型 注射部位统一为裸鼠右前肢腋窝靠背部0.3 cm 处，碘伏棉球消毒后，使用1 6 ml 注射器抽取混匀的细胞悬液（密度为2×10 /ml ）0.2 ml ，注射器针头刺透裸鼠 皮肤后，略上挑针头，移至注射部位，缓慢注射细胞悬液。注射完毕后，无菌棉 球按压进针处，将实验器械及废弃物无害化处理。刚建模的裸鼠放入更换新垫料 的笼具，于次日观察裸鼠的精神状态及活动进食情况，注射部位是否有红肿。 3. 分组及药物干预 待裸鼠出现小结节（大约接种第7 天），生理盐水（NS ）治疗组腹腔注射 100 μl/次生理盐水，2 次/周持续5 周；顺铂（CDDP ）组腹腔注射CDDP （2 mg/kg/次），2 次/周持续5 周。具体分组如下： （1）Group-1 （n=6 ） （2 ）Group-2 （n=6 ） （3 ）Group-3 （n=6 ） （4 ）Group-4 （n=6 ） （5 ）Group-5 （n=6 ） 公司总部地址：南京市江北新区生物药谷中丹园A 座2007 室；邮编：210042 ；电话：025 4. 检测指标 （1）动物观察：记录裸鼠体重、精神状态、兴奋度、撕咬、活动等情况。 （2 ）肿瘤测量：肉眼可见形成肿瘤后，用游标卡尺测量移植瘤体是短径 3 2 （W ）、长径（L ），按公式V