噬菌体展示技术及.ppt

第一张，课件共十九张，编辑于2022年5月 噬菌体 噬菌体是感染细菌、支原体、螺旋体、放线菌以及蓝细菌等的一类病毒，亦称细菌病毒。 噬菌体的结构简单，基因数较少，已成为分子生物学研究的重要工具；另外，因其还可作基因的载体，故又被广泛应用于遗传工程的研究。 第二张，课件共十九张，编辑于2022年5月 噬菌体 ？ 噬菌体展示技术 第三张，课件共十九张，编辑于2022年5月 Ph.D.由来 1985年，Smith首次将外源基因插入丝状噬菌体f1的基因Ⅲ，使目的基因编码的多肽以融合蛋白的形式展示在噬菌体表面，从而创建了该技术。 1988年Parmley发现已知抗原决定簇与PⅢ的N端融合在噬菌体表面后，可特异性地被抗体选中，因此提出了通过构建随机肽库了解抗体识别的抗原表位的设想。 1990年Scott将噬菌体随机多肽库成功应用于筛选抗原表位，之后国内外学者进行了大量的相关研究，有力地推动了病毒抗原表位的研究进程。 第四张，课件共十九张，编辑于2022年5月 Ph.D.概念 噬菌体展示：将外源肽或蛋白与特定噬菌体衣壳蛋白融合并展示于噬菌体表面，进而通过筛选表达有目的肽或蛋白质的噬菌体，得到大量富集，然后通过DNA序列测定进行定性。 第五张，课件共十九张，编辑于2022年5月 融合蛋白 M13噬菌体展示外源基因模式图 第六张，课件共十九张，编辑于2022年5月 因此，噬菌体展示技术堪称表型与基因型的统一。外源蛋白或多肽的表型和基因型被统一在了同一噬菌体颗粒内，通过表型筛选就可以获得其编码基因。 第七张，课件共十九张，编辑于2022年5月 Ph.D.系统类型 根据所用噬菌体类型的不同，又可以分为丝状噬菌体(M13，fd,f1)展示系统、λ噬菌体展示系统、T4噬菌体展示系统、T7噬菌体展示系统、噬菌粒展示系统等。 第八张，课件共十九张，编辑于2022年5月 λ噬菌体展示系统 第九张，课件共十九张，编辑于2022年5月 T4噬菌体展示系统 1.T4噬菌体病毒颗粒是在宿主细胞内组装，被组装的融合蛋白无需通过质膜，不需要通过分泌途径，因而其表面展示多肽和蛋白的范围广。同时噬菌体还能在体外组装，这对构建表面展示噬菌体十分方便。 2. T4噬菌体展示周期在基于T4生命的非必需衣壳蛋白SOC和HOC。 第十张，课件共十九张，编辑于2022年5月 M13噬菌体展示系统 Ph.D.-12TM噬菌体展示肽库试剂盒将随机十二肽融合到M13噬菌体次要衣壳蛋白（pⅢ）上，因此是一个组合文库。 融合蛋白模式图 第十一张，课件共十九张，编辑于2022年5月 K = G or T; M = A or C 随机十二肽-gⅢ融合蛋白的N末端序列 第十二张，课件共十九张，编辑于2022年5月 文库的随机序列区域仅用32个密码子编码所有20种氨基酸。这使单密码子氨基酸的出现频率相对较高，同时排除了三个终止密码子中的两个。在构建该文库的菌株中，琥珀终止子TAG (*)可被Gln抑制。 精简密码子表 第十三张，课件共十九张，编辑于2022年5月 Ph.D.生物淘洗程序示意图 洗去未结合的噬菌体 洗得特异性结合的噬菌体 包被靶分子并加入肽库，肽库特异性吸附靶分子 于ER2738扩增后进行下一轮淘洗 第十四张，课件共十九张，编辑于2022年5月