试谈喜树内生真菌产喜树碱菌株的筛选及药化（资料）.docVIP

试谈喜树内生真菌产喜树碱菌株的筛选及药化（资料） 文档信息 ： 文档作为关于“医学心理学”中“重症医学”的参考范文，为解决如何写好实用应用文、正确编写文案格式、内容素材摘取等相关工作提供支持。正文8566字，doc格式，可编辑。质优实惠，欢迎下载！ 目录 TOC \o "1-9" \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：试谈喜树内生真菌产喜树碱菌株的筛选及药化 1 0439-8114（2014）03-0565-04 1 1 材料与策略 2 2 结果与分析 3 文2：产甲壳素酶菌株的筛选与诱变 6 参考文摘引言： 14 原创性声明（模板） 15 文章致谢（模板） 15 正文 试谈喜树内生真菌产喜树碱菌株的筛选及药化（资料） 文1：试谈喜树内生真菌产喜树碱菌株的筛选及药化 0439-8114（2014）03-0565-04 喜树 （Camptothecaa cuminata Decne.）又名旱莲木、千仗树，属珙桐科（蓝果树科、紫树科）（Nyssaceae）喜树属（Camptotheca Decne.），多年生亚热带落叶阔叶树，是我国特有的树种，在我国的分布较为广阔，南至云南的西双版纳，北至山西秦岭地区[1]。喜树中含有多种有活性的化合物，如喜树碱、喜树次碱，10-羟基喜树碱等。研究表明，喜树碱及其衍生物具有显著的抗肿瘤活性，现已用于直肠癌及卵巢癌的临床治疗[2]。从植物内生真菌与寄主植物同步演化关系推测，喜树内生真菌的代谢产物中可能含有喜树碱及其衍生物[3]。目前对于喜树的研究主要集中在喜树碱及其衍生物的提取、纯化、检测等工艺上，而对其内生真菌代谢产物的研究报道较少。以内生真菌与植物的特殊关系为切入点研究喜树内生真菌与喜树碱及其衍生物的相关性，可以为喜树碱及其衍生物的开发以及为寻找新型抗癌药物开辟一条新的道路。 1 材料与策略 材料及培养基 从喜树根、茎、叶、果实中分离得到151株内生真菌。 马铃薯葡萄糖（PDA）培养基：沸煮后的马铃薯汁加葡萄糖20 g，不加琼脂，灭菌。喜树种子煎汁培养基：称取50 g喜树种子粉碎后煮沸30 min，添加到100 mL PDA培养基中。 策略 标准溶液的配制 分别精确称取喜树碱及10-羟基喜树碱标准品 5 g，置于25 mL容量瓶中，用甲醇（分析纯）溶解，超声波助溶，最后定容，浓度分别为、 mg/mL。 菌株的发酵及样品溶液的制备 采用两种培养基对待测菌株进行液体发酵，一是PDA培养基，二是喜树种子煎汁培养基。灭菌后接入一定量的菌丝体， 28 ℃、120 min 旋转培养，7 d后将发酵液用2层纱布过滤得到菌丝球，40 ℃干燥，粉碎。 菌丝体处理策略：称取～ g粉碎后的菌丝，加入甲醇（分析纯）5 mL，超声波破碎30 min，静置24 h，取其上清液并用甲醇补足损失的重量，12 000 min离心10 min，重复两次， μm纤维虑膜过滤。发酵液处理策略：将发酵液装入旋转蒸发仪中，50 ℃旋转蒸发至干，加入5 mL甲醇（色谱纯）溶解，超声波30 min助溶，静置24 h后用 μm油性纤维滤膜过滤2～3次。 HPLC色谱条件 C18柱（直径15 cm×4 mm ID），检测波长360 nm，流速 mL/min，柱温55 ℃，流动相甲醇、水体积比为4∶6，进样体积10 μL。 喜树内生真菌产喜树碱菌株的筛选及药化相关范文由写论文的好帮手http:，转载请保留 ..4 标准曲线的绘制 将喜树碱标准液的浓度分别稀释成、、、、 mg/mL。10-羟基喜树碱标准液的浓度稀释成： 5、 0、 5、 0、 5 mg/mL。按照“”的色谱条件进样测定，每个浓度重复3次，取峰面积平均值，得出峰面积（y）与浓度（x）的线性回归方程。 2 结果与分析 产喜树碱或10-羟基喜树碱菌株的初筛结果 分别对内生真菌的发酵液和菌丝体提取液进行处理，采用TLC法初步筛选发现，用PDA培养基培养的内生真菌发酵液和菌丝体不含喜树碱或10-羟基喜树碱；用喜树种子煎汁培养基培养的内生真菌，其发酵液不含喜树碱或10-羟基喜树碱，但在菌丝体提取液中发现有3株内生真菌的检测斑点与喜树碱标准品的斑点相对应（标准品Rf=，样品Rf值分别是、、），这3株菌分别是QZ04、CY02和XY09，见图1；并且还发现有1株编号为XY05的内生真菌的检测斑点与10-羟基喜树碱标准品的斑点相对应（标准品Rf=，样品Rf=），见图2。初步判断为是产活性产物的菌株，并对其进行了形态学和分子生物学的鉴定，还需用HPLC法再进行定性定量的检测。 产喜树碱或10-羟基喜树碱菌株的定性分析 标准品的HPLC图 标准品的HPLC图谱见图3。喜树碱标准品保留时间为 min，峰面积为 mAU；10-羟基喜树碱标品