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RGS4在HUEVCs凋亡中的作用及地塞米松对其的影响 目录 TOC \o "1-9" \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：RGS4在HUEVCs凋亡中的作用及地塞米松对其的影响 1 1 资料与方法 2 2 结果 4 3 讨论 6 文2：成肌纤维细胞在哮喘气道重塑中的作用及地塞米松对其的影响 7 1 材料和方法 9 2 结果 11 3 讨论 12 参考文摘引言： 14 原创性声明（模板） 15 文章致谢（模板） 15 正文 RGS4在HUEVCs凋亡中的作用及地塞米松对其的影响 文1：RGS4在HUEVCs凋亡中的作用及地塞米松对其的影响 Abstract Objective To study the role of RGS4 in apoptosis of HUEVCs in normoxia or hypoxia and the effect of dexamethasone on HUEVCs were cultured in the simulated normoxia or hypoxia of O2/N2/CO2 cell incubator and were trafected with the eukaryotic expression vector of RGS4; the flow cytometer (Annexin-V-FITC-PI) was applied to detect its apoptosis. Results The trafection of RGS4 and treatment of dexamethasone had no obvious effect on the apoptosis in normoxia while the apoptosis of HUEVCs increased in hypoxia (P Keywords apoptosis　　 dexamethasone　　 RGS4 急性肺损伤是肺脏炎症和肺微血管通透性增加的急性、进行性呼吸衰竭，其最终阶段即急性呼吸窘迫综合征。血管内皮细胞是连续性衬在血管腔内面，参与体内许多生理和病理生理过程，如维持血管完整性、分泌和释放活性物质、维持血管张力等。在急性肺损伤过程中，肺微血管的变化尤为引人注目，内皮细胞受损被认为是急性肺损伤发生、发展的病理基础。国内外多项研究表明［1～4］，急性肺损伤时内皮细胞发生凋亡，从而导致肺血管内皮－上皮屏障受到破坏，导致血管通透性增加，引起肺水肿和气体交换障碍，地塞米松可以抑制血管内皮细胞的凋亡［6，7］，减轻肺损伤。 本研究拟采用HUEVC内皮细胞株，采用常氧和低氧培养，观察RGS4表达质粒转染后皮细胞凋亡和地塞米松处理后内皮细胞凋亡的变化，以阐明RGS4在内皮细胞凋亡中的作用以及地塞米松处理对其的影响。 1 资料与方法 主要试剂 质粒：RGS4 in (+)(RGS，GUTHRIE cDNA Resource Center，美国)，(+)，质粒大量抽提试剂盒(.A. Plasmid Maxiprep Kit， Omega)，Lifofectamin Plus TM Reagent(Invitrogen，美国) 实验分组及指标检测时相点 （1）常氧实验分组：1) 空白对照组：(control N1)；2) (+)组：(转染(+)空质粒，cotrol N2)；3) RGS4转染组：(转染RGS4表达质粒，RGS4N)；4)RGS4转染＋地塞米松处理组(RGS4＋DEX N)；（2）低氧实验分组(1％O2／5％CO2／94 N2％)：1) 空白对照组：(control H1)；2) (+)组：(转染(+)空质粒，cotrol H2)；3) RGS4转染组：(转染RGS4表达质粒，RGS4H)；4) RGS4转染＋地塞米松处理组(10－7M )(RGS4＋DEX H)（3）检测时相点：流式细胞仪检测细胞凋亡分别于低氧处理后6小时、24小时和48小时测定。 RGS4以及(+)质粒的扩增与提取 常规方法扩增RGS4与(+)质粒并采用质粒提取试剂盒提取质粒以用于转染 HUEVC细胞的培养 取液氮中冻存的HUEVC细胞株，迅速放入40℃水浴中，快速溶解细胞。超净工作台内将细胞悬液移入离涯管中，滴加DMEM培养基至8毫升，洗涤细胞。2000转、离心5分钟、弃上清，用DEME再次洗涤沉淀。沉淀用DEME培养基＋小牛血清悬浮+3%内皮细胞生长因子，移入到细胞培养瓶中培养备用。 质粒转染(Lipofectamine plus法) 细胞接种，6孔板常规接种2×105细胞/每孔；待细胞贴壁，长至培养