北京大学医学部攻读硕博士学位研究生课题研究计划书样本.docx

北京大学医学部攻读硕博士学位研究生课题研究计划书 北京大学医学部 攻读-士学位研究生课题研究计划书 研究生 学号 年级 院（部）北京大学/香港科技大学医学中心 专业 医学生物化学与分子生物学 导师 方征宇 课题研究开始日期： 03月09日 北京大学研究生院医学部分院培养办公室制表 说明 一、本计划书由研究生本人在本学科内作过开题报告后填写，一式三份；经院（部）主管部门批准后一份留教研室,一份留院（部）主管部门，一份送研究生院医学部分院培养办公室备案。 二、计划批准后不得随意更改。如有特殊情况确需变更者，需填写变更报告，逐级审批。本文档所提供的信息之用，不能作为科学依据，请勿模仿。 研究课题名称 黑色素瘤顺销获得性耐药相关microRNA筛选及其功能的研究本文档所提供的信息之用，不能作为科学依据，请勿模仿。文档如有不当之处，请联系本人或网站删除。 研究课题的目的、理论与实际意义、国内外研究情况简介 课题的目的： 1、构建黑色素瘤顺销获得性耐药细胞株，与其原始株进行microRNA的高通量筛选比较，找到耐药相关的microRNA,作为潜在的治疗靶点。 2、分析耐药相关microRNA通过调控哪些基因的表达来影响黑色素瘤细胞的耐药性，阐明其分子机制。 理论与实际意义： 近几十年来,恶性黑色素瘤在全球的发病率迅猛升高，成为所有恶性肿瘤中发病率增长最快的肿瘤，年增长率几乎达到3-5%o其中白色人种发病率明显高于其它人种，，我国和日本等亚洲国家的黑色素瘤发病率与欧美国家相比相对较低，但近年来其发病率呈迅猛上升趋势。恶性黑色素瘤治疗方法主要有手术治疗、放射治疗、化学药物治疗及生物免疫治疗等。化疗在恶性黑色素瘤治疗中仍占有重要地位。当前化疗药物主要有顺钧、长春新碱和组蛋白本文档所提供的信息之用，不能作为科学依据，请勿模仿。文档如有不当之处，请联系本人或网站删除。 去乙酰化酶抑制剂等。顺钧是现在临床上多种化疗方案中的主要药物之一，通过与癌细胞的脱氧核糖核酸发生交叉联结，诱导肿瘤细胞的凋亡而起抗癌作用，属细胞增殖周期非特异性药物，但是多种恶性黑色素瘤常会对顺钧产生天然或获得性耐药，因而提高顺销的抗肿瘤作用,解决顺箱耐药在恶性黑色素瘤的化疗中有着重要的实际意义。顺销耐药机制，主要包括细胞内药物积累的减少，DNA损伤修复作用增强，凋亡通路的变化以及一些microRNA的异常表达。由于microRNA的表达易于调控，如果能找到黑色素瘤中与耐药相关的microRNA,可建立以此为靶点的干预手段。 国内外研究情况简介： 在其它肿瘤细胞中，已经有人验证出一些microRNA的变化会影响肿瘤对顺箱的敏感性，而当前关于microRNA在黑色素瘤顺销获得性耐药机制中的作用研究较少。 主要研究内容 研究内容1:构建黑色素瘤顺销耐药株 选取了七种黑色素瘤细胞系M7、M21、SK-ME1.-103、M29、A375、M8、SK-ME1.-19依次检测对顺销的敏感性，在对顺销比较耐受的细胞株中选取了A375、M8、SK-ME1.-19构建了顺销耐药株并将A375、M8做了microRNA的表达谱芯片。 研究内容2:黑色素瘤顺销耐药株与原始株microRNA芯片分析及验证 通过分析microRNA表达谱芯片，对黑色素瘤顺钧耐药株中异常表达的microRNA用荧光定量PCR进行验证,确定要研究的microRNA。 研究内容3:顺销耐药相关基因反向筛选预测microRNA 查阅文献，汇总顺箱耐药相关基因，在黑色素瘤顺钠耐药株与原始株中用荧光定量PCR验证,根据耐药基因的变化反向预测microRNAo 研究内容4：microRNA对黑色素瘤顺销耐药的影响 及其分子机制 根据microRNA靶基因预测数据库找到靶基因，进一步研究microRNA对顺箱黑色素瘤耐药的影响及其分子机制。 主要研究方法 1、构建黑色素瘤顺销耐药株 MTS法检测药物敏感性以及顺箱耐药株的耐药指数。 2、黑色素瘤顺销耐药株与原始株microRNA芯片分析及验证Rea1.-timePCR验证microRNA芯片结果。 3、顺裕耐药相关基因反向筛选预测microRNARea1.-timePCR验证顺销耐药相关基因，microRNA靶基因预测数据库分析结果。 4、microRNA对黑色素瘤顺钧耐药的影响及其分子机制Dua1.-1.uciferaseReporter验证microRNA与靶基因的关系，慢病毒构建靶基因相关稳转株，WesternB1.otting验证靶基因相关蛋白的变化。 研究进度及具体安排 3月-8月进度:黑色素瘤顺销耐药株构建 9月-12月进度:microRNA芯片分析及验证，顺销耐药相关基因的筛选 1月-10月安排：microRNA对黑色素瘤顺钧耐药的影响及其分子机制的研究 预期结果