薄层色谱扫描法（二） .docxVIP

PAGE PAGE 1 薄层色谱扫描法（二） (三) 系统适用性实验 按各品种项下要求对试验条件举行系统适用性实验，即用供试品和标准物质对试验条件举行实验和调节，应符合规定的要求。1. 比移值(Rf值)系指从基线至绽开斑点中央的距离与从基线至绽开剂前沿的距离的比值。杂质检查时，各杂质斑点的比移值(Rf值)以在0.2～0.8之间为宜。2. 检出限系指限量检查或杂质检查时，供试品溶液中被测物质能被检出的最低浓度或量。普通采纳已知浓度的供试品溶液或对比标准溶液，与稀释若干倍的自身对比标准溶液在规定的色谱条件下，在同一薄层板上点样、绽开、检视，后者显清楚可辨斑点的浓度或量作为检出限。3. 分别度(或称分别效能)鉴别时，供试品与标准物质色谱中的斑点均应清楚分别。当薄层色谱的扫描法用于限量检查和含量测定时，要求定量峰与相邻峰之间有较好的分别度，分别度(R)的计算公式为：R=2(d2-d1)/(W1+W2)(式7-3)式中，d2为相邻两峰中后一峰与原点的距离；d1为相邻两峰中前一峰与原点的距离；W1及W2为相邻两峰各自的峰宽。除另有规定外，分别度应大于1.0。4. 相对标准偏差薄层扫描含量测定时，同一供试品溶液在同一薄层板上平行点样的待测成分的峰面积测量值的相对标准偏差应不大于5.0%；需显色后测定的或者异板的相对标准偏差应不大于10.0%。5. 测定法(1) 鉴别：按各品种项下规定的办法，制备供试品溶液和对比标准溶液，在同一薄层板上点样、绽开与检视，供试品色谱图中所显斑点的位置和色彩(或荧光)应与标准物质色谱图的斑点全都。(2) 限量检查与杂质检查：按各品种项下规定的办法，制备供试品溶液和对比标准溶液，并按规定的色谱条件点样、绽开和检视。供试品溶液色谱图中待检查的斑点与相应的标准物质斑点比较，色彩(或荧光)不得更深；或照薄层色谱扫描法操作，测定峰面积值，供试品色谱图中相应斑点的峰面积值不得大于标准物质的峰面积值。含量限度检查应按规定测定限量。(3) 含量测定：照2015年版《中国药典》四部薄层色谱扫描法(通则0502)，按各品种项下规定的办法，制备供试品溶液和对比标准溶液，并按规定的色谱条件点样、绽开、扫描测定；或将待测色谱斑点刮下经洗脱后，再用相宜的办法测定。二、薄层色谱扫描仪的操作办法(一) 仪器组成薄层扫描仪主要由光源、单色器、薄层板台、检测器以及工作站组成。1. 光源在可见光区域主要用法钨灯(370～700nm)，紫外区多用法钨灯(200～400nm)。此外，还有汞灯、氙灯等。其中汞灯为线光源，可放射特征辐射光谱。2. 单色器用来提供一定波长的单色光。其结构与普通的紫外分光光度计类似，通常由人射狭缝、出射狭缝、平行光装置、色散组件等组成。薄层扫描仪多采纳光栅为其色散组件。3. 薄层板台扫描时薄层板固定于薄层板台上，薄层板台可横向及纵向移动，以完成对整块薄层板的扫描。4. 检测器多采纳光电倍增管。此外，还有监测入射光能量的参比光电倍增管，以削减入射光强度变幻对扫描结果的影响。5. 工作站可设定仪器参数，接收并存储扫描结果，举行积分和其他计算。(二) 仪器扫描波长的精确?????度检查仪器波长精确?????度的检查：可利用汞灯的特征谱线光谱对仪器的波长精确?????度举行检查。选取汞灯，在200～700nm波长范围内以荧光方式对空白硅胶G板扫描汲取图谱，图谱中的峰位波长与汞灯谱线中相应波长的差即为仪器波长精确?????度。汞灯谱线的已知波长为253.6nm，313.0nm，334.2nm，365.0nm，404.7nm，435.8nm，546.1nm，578.0nm。在CAMAG等仪器的工作站中有专用的仪器检定软件，按要求操作即可自动举行仪器波长精确?????度等检查。其结果应符合相应仪器的有关规定。(三) 薄层扫描法定量测定的操作和基本要求1. 点样应按各品种项下规定，制备的供试品和对比品溶液应交错点于同一薄层板上，供试品点样不得少于4个，对比品每一浓度不得少于2个。2. 色谱分别应照薄层色谱法标准操作规程举行操作，保证色谱的质量。3. 扫描测定测定时应按各品种项下的规定，依据不同仪器的结构特点及用法解释，正确挑选仪器参数举行扫描。(四) 注重事项1. 除另有规定外，薄层色谱扫描法含量测定应用法市售预制薄层板。2. 薄层色谱分析的各个步骤如点样、绽开等，均会影响薄层扫描结果的精确?????性与重临性，因此在试验的各个步骤均应严格操作。3. 扫描时应沿绽开方向自下而上举行扫描，不能横向扫描。4. 测定记录中应包括薄层色谱扫描图，峰面积积分值，工作曲线、回来方程和相关系数，以及测定结果计算办法。5. 为保证测定结果的精确?????性，采纳外标一点