薄层色谱法的优缺点及操作步骤 .docxVIP

PAGE PAGE 1 薄层色谱法的优缺点及操作步骤 (1)定义薄层色谱，或称薄层层析，薄层层析是把支持物匀称涂布于支持板(常用玻璃板，也可用涤纶布等)上形成薄层，然后用相应的溶剂举行绽开。从而对混合样品举行分别、鉴定和定量的一种层析分别技术。 (2)分类薄层层析可按照作为固定相的的支持物不同，分为薄层吸附层析(吸附剂)、薄层分配层析(纤维素)、薄层离子交换层析(离子交换剂)、薄层凝胶层析(分子筛凝胶)等。普通试验中应用较多的是以吸附剂为固定相的薄层吸附层析。(3)办法的优缺点①优点：操作便利、设备容易、显色简单等特点，同时绽开速率快，普通仅需15～20min；混合物易分别，辨别力普通比以往的纸层析高10～100倍，它既适用于惟独0.01μg的样品分别，又能分别大于500mg的样品作制备用，而且还可以用法如浓硫酸、浓盐酸之类的腐蚀性显色剂。②缺点：对生物高分子的分别效果不甚抱负。(3)操作步骤①薄层板制备：除另有规定外，将1份固定相和3份水在研钵中向一方向研磨混合，去除表面的气泡后，倒入涂布器中，在玻板上平稳地移动涂布器举行涂布(厚度为0.2～O.3mm)，取下涂好薄层的玻板，置水平台上于室温下晾干，后在110℃烘30min，即置有干燥剂的干燥箱中备用。用法前检查其匀称度(可通过透射光和反射光检视)。②点样：除另有规定外，用点样器点样于薄层板上，普通为圆点，点样基线距底边2.Ocm，样点直径及点间距离同纸色谱法，点间距离可视斑点蔓延状况以不影响检出为宜。点样时必需注重勿损伤薄层表面。③绽开：绽开室如需预先用绽开剂饱和，可在室中加入足够量的绽开剂，并在壁上贴二条与室一样高、宽的滤纸条，一端浸入绽开剂中，密封室顶的盖，使系统平衡或按正文规定操作。将点好样品的薄层板放入绽开室的绽开剂中，浸入绽开剂的深度为距薄层板底边0.5～1.Ocm(切勿将样点浸入绽开剂中)，密封室盖，待绽开至规定距离(普通为10-15cm)，取出薄层板，晾干，按各品种项下的规定检测。④显色：取出的薄层板，立刻喷洒显色剂，使其显色，计算Rf值或使之浮现各种有色的斑点，与标准举行对比比较，可确定其成分。