薄层色谱法的基本原理和方法 .docxVIP

PAGE PAGE 1 薄层色谱法的基本原理和方法 薄层色谱法系将固定相匀称地涂铺在具有光滑表面的玻璃、塑料或金属板上形成薄层，在此薄层上用绽开剂绽开，使供试品所含的成分分别，将所得的色谱图与对比物按同法所得的色谱图比较，用于药品的鉴别或杂质检查的一种办法。按分别机制薄层色谱法可分为吸附、分配和胶束薄层色谱法。固定相为吸附剂的薄层色谱法称为吸附薄层色谱法；利用样品中的各组分在固定相与绽开剂之间的分配系数的差别而实现分别的薄层色谱法称为分配薄层色谱法；以表面活性剂胶束溶液为绽开剂的薄层色谱法称为胶束薄层色谱法。 一、薄层色谱法的器材1.薄层板(1)自制薄层板：自制薄层板系指手工(或借助涂布器)将固定相涂布于玻璃板(或其他相宜的载板)上使成为有一定厚度的匀称薄层。除另有规定外，玻璃板要求光洁、平整，洗净后不附水珠，晾干。最常用的固定相有硅胶G、硅胶GF254、硅胶H和硅胶HF254，第二有硅藻土、硅藻土G、氧化铝、G 微晶纤维素、微晶纤维素F254、烷基硅烷键合硅胶等。其颗粒大小普通要求粒径为5～40um。过去试验室经常自制薄层板，如今购置市售薄层板更为普遍。(2)市售薄层板：分一般薄层板和高效薄层板。常用的有硅胶薄层板、硅胶GF254薄层板、薄层板和氧化铝薄层板等。高效薄层板的粒径普通为5～10um。2．点样器有手动、半自动或自动点样等方式，手动点样时普通采纳微量注射器或定量毛细管，应能使点样位置正确、集中。3．绽开容器应用法适合薄层板大小的平底或双槽薄层色谱专用绽开缸，并配有严密的盖子。水平绽开时用法专用的水平绽开缸。4．显色剂按各品种项下的规定。可采纳喷雾显色、浸渍显色或置相宜试剂(如碘、浓氨水、浓盐酸等)的蒸气中熏蒸显色，检出斑点。5．显色装置喷雾显色可用法玻璃喷雾瓶或专用喷雾器，用压缩气体使显色剂呈匀称的细雾状喷出；浸渍显色可用专用玻璃器皿或相宜的玻璃缸代替；蒸气熏蒸显色可用双槽玻璃缸或相宜大小的干燥器代替。6. 检视装置为装有可见光、短波紫外光(254nm)、长波紫外光(365nm)光源及相应滤光片的暗箱，可附加摄像设备供拍摄色谱图用，暗箱内的光源应有足够的光照度。二、薄层色谱法的操作办法1．薄层板制备(1)自制薄层板：自制薄层板普通可分为无黏合剂和含黏合剂两种。无载合剂薄层板系将固定相挺直涂布于玻璃板上，除另有规定外，将1份固定相和3份水在研钵中沿同一方向研磨混合，去除表面的气泡后，置玻璃板上使涂布匀称或倒入涂布器中，在玻璃板上平稳地移动涂布器举行涂布(厚度为0.2～0.3mm)，取下涂布好的薄层板，置水平台上，于室温下晾干后，在110℃活化30分钟，随即置于有干燥剂的干燥器中备用。含黏合剂薄层板除另有规定外，系将固定相中加入一定量的黏合剂，普通常用10%～15%锻石膏(CaSO4·2H2O在140℃加热4小时)，混匀后加水适量，或用0.2％～0.5%水溶液(取羧甲基纤维素钠适量，加入一定量的水后，放置使溶胀，加热煮沸至彻低溶解，放置，取上清液，即得)适量，在研钵中沿同一方向研磨混合调成糊状，去除表面的气泡后，匀称涂布于玻璃板上，晾干，活化后备用。薄层板用法前应检查其匀称度(可通过透射光和反射光检视)，表面应匀称、平整、光洁，无麻点、无气泡、无破损、无污染。(2)市售薄层板：临用前普通应在110℃活化30分钟。聚酸胺薄膜不需要活化。铝基片薄层板或聚酰胺薄膜均可按照需要剪裁，但须注重剪裁后的薄层板底边的涂层不得有破损。如在存放期间被空气中的杂质污染，用法前可用相宜溶剂在绽开容器中上行绽开预洗，110℃活化后，置于干燥器中备用。2．点样除另有规定外，在洁净干燥的环境下，用点样器点样于薄层板上，普通为圆点，位置应正确、集中。点样基线距底边2.0cm(高效薄层板普通为0.8～1.0cm)，样点直径为2～4mm(高效薄层板为1～2mm)，点间距离可视斑点蔓延状况以不影响检出为宜，普通为1.0～2.0cm高效薄层板可不小于5mm)。点样时必需注重勿损坏薄层板表面。3．绽开层析缸预先用绽开剂饱和可避开边缘效应。如需预饱和，可在缸中加入足够量的绽开剂，须要时在壁上贴两条与缸一样高的宽滤纸条，一端浸入绽开剂中，密封顶盖，普通保持15～30分钟，使系统平衡或按各品种项下的规定操作。将点好供试品溶液的薄层板放入绽开缸的绽开剂中，浸入绽开剂的深度为距薄层板底边0.5～1.0cm(切勿将样品点浸入绽开剂中)，密封顶盖，待绽开至相宜的距离(如20cm长的薄层板，展距普通为10～15cm，高效薄层板展距普通为5cm左右)，取出薄层板，晾干，按各品种项下的规定检视。绽开剂可以向一个方向举行，即单向绽开；也可以举行双向绽开，即先向一个方向绽开，取出，待绽开剂彻低挥发后，将薄层板转动90o，