吉林大学发光免疫分析法.ppt

夹心法 ： （检查大分子抗原多采用） ? Sp-Ab+Ag ? Sp-Ab-Ag ? Sp-Ab-Ag+Ab-L ? Sp-Ab-Ag-Ab — 启动发光试剂 ——— ? hv ? 其中 :L 为发光标记物或发光底物 , Ag 为抗原 , Ab 为抗体 , Sp 为固相。 发光免疫分析法 Luminescence Immunoassay / 一． 概论 免疫性是动物在长期进化过程中逐渐发展 起来的防御感染和维护机体完整性的 十分有效 而灵巧的手段 。 免疫系统的特殊功能是识别“ 自我 ”和 “ 非自我 ”的物质，对自身的物质不起反应， 而对外源的及体内改变了的物质则能起专一的 免疫反应，排除其对机体的危害。另一方面， 免疫系统还担负着维持机体免疫状态的自身稳 定性，以清除体内衰老和突变的细胞。 1 ． 抗体和抗原（ Antigen , Antibody ） 免疫学的重要对象是抗原和抗体的反应问题。 抗原 是一种外来物质，当其进入动物体内能 引起 抗体 的产生，并能和抗体反应的物质。 抗体 (antibody . Ab) 与抗原 (antigen . Ag) 的结合具有极高的专一性和亲合性。 不能诱导产生抗体，但能和适当抗体起反应， 即有免疫反应性的简单分子称为 半抗原 。 （ 1 ）抗原 蛋白质，多糖，核酸，合成多肽，低分子物质 （ 2 ）抗体 抗体是一种蛋白质（主要是 γ - 球蛋白质） 血清蛋白质在自由电泳场中 白蛋白 α - 球蛋白 β - 球蛋白 γ - 球蛋白 抗体存在于 β - 球蛋白和 γ - 球蛋白内 这些蛋白质称为免疫球蛋白 IgM . IgA . IgG . IgD 和 IgE γM . γA . γG . γD . γE 2. 放射性免疫分析（ RIA ） 1959 Berson 和 Yallow 将免疫反应与分析化学相结合创立了放射性免疫分析法。 荷尔蒙的测定 先将荷尔蒙注入天竺鼠体内 对抗此抗原的抗体（ Ab ） Ag * + Ab === Ag * -Ab 要测定一病人的血清标本中荷尔蒙的浓度， Ag + Ag * -Ab === Ag-Ab + Ag * ( + Ag * -Ab ) 测定 Ag * ，可计算标本中所含有的荷尔蒙（ Ag ）浓度 1977 获诺贝尔医学生物学奖 分析对象： 测量含量很低的生物活性化合物： 如蛋白质（酶，接受体，抗体） 激素（甾族化合物，甲状腺激素，酞激素） 药物及微生物等。 优点：专一性强，灵敏度高 缺点： ①放射性同位素可能损害人们的身体健康，以致 于实验室要有特殊防护技术 ②该法还需要用贵重的闪烁计数器和试剂 ③稳定性 - 同位素的寿命相对较短 3 酶免疫分析法 用酶标记抗原或抗体 例：酶联免疫法测定氯霉素 微量反应板 —— 羊抗兔 IgG 抗体 兔抗氯霉素抗体 + 氯霉素酶结合物 + 氯霉素样品 没有结合的酶结合物被洗去，再向相应孔中加入 过氧化氢和邻苯二胺，作用一定时间后，结合后的酶 结合物将无色的邻苯二胺转化为蓝色的产物，加入终 止液后颜色由蓝变黄，用波长 450nm （双波长时最适 参考波长 ≥ 600nm ）酶标仪进行检测，吸光值与样品 中氯霉素含量成反比。 酶不稳定、光度分析线性范围窄 竞争型酶联免疫法测定氯霉素含量示意图 4. 发光免疫分析法 荧光免疫分析法 化学发光免疫分析法 以荧光物质或化学发光反应物质作为标记物。 优点： 专一性强 灵敏度高 稳定性好，可避免放射性污染 标记物不同，因而检测方法也不同 二．荧光免疫分析法 Fluonescense Immuuoassay 1 ．荧光探针 （ 1 ） 一般要求 a 检测最常遇到的样品为血清，它有很高的荧光 背景。