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微囊藻毒素-LR 暴露对斑马鱼肾脏组织和子代胚胎孵化率的影响及其机制 目 录 摘要 i Abstract iii 缩略词表 （Abbreviations ） v 1 文献综述 1 1.1 微囊藻毒素简介 1 1.1.1 微囊藻毒素的产生 1 1.1.2 微囊藻毒素结构 1 1.1.3 微囊藻毒素的理化性质 2 1.2 微囊藻毒素的环境浓度 3 1.3 微囊藻毒素在生物体内蓄积 3 1.4 微囊藻毒素的致毒机制 4 1.5 微囊藻毒素的毒性效应 5 1.6 斑马鱼简介 7 1.7 论文研究目的和意义 7 2 微囊藻毒素-LR 暴露对雌性斑马鱼肾脏组织的影响及其机制的探究 9 2.1 引言 9 2.2 材料与方法 10 2.2.1 试剂 10 2.2.2 斑马鱼饲养 以及暴露实验 10 2.2.3 肾脏组织学检测 11 2.2.4 肾脏TUNEL 染色 12 2.2.5 转录组分析 13 2.2.6 活性氧（ROS ）检测 16 2.2.7 基因表达分析 16 2.2.8 蛋白表达检测 20 2.2.9 Caspase 酶活性检测 22 2.2.10 统计分析 23 2.3 实验结果 24 I 华中农业大学 2019 届硕士研究生学位 （毕业）论文 2.3.1 肾脏组织学变化 24 2.3.2 转录组学分析 26 测序质量评估 26 RNA-seq 整体质量评估 26 RNA-seq 基因差异表达 27 差异基因 GO 和 KEGG 富集分析 29 2.3.3 TUNEL 染色分析 33 2.3.4 ROS 含量分析 34 2.3.5 凋亡相关基因表达 34 2.3.6 蛋白表达分析 35 2.3.7 Caspase 酶活性和基因表达分析 37 2.4 讨论 39 3 微囊藻毒素-LR 母体暴露对子代斑马鱼胚胎孵化的影响及其机制的探究 42 3.1 引言 42 3.2 材料方法 44 3.2.1 试剂 44 3.2.2 斑马鱼的饲养及暴露 44 3.2.3 MCLR 的检测 44 3.2.4 NPS 含量检测 46 3.2.5 孵化酶活性检测 46 3.2.6 基因表达分析 47 3.2.7 统计分析 48 3.3 实验结果 49 3.3.1 NPS 的表征 49 3.3.2 NPS 对 MCLR 的吸附 50 3.3.3 胚胎中 MCLR 和 NPS 的含量 51 3.3.4 斑马鱼子代孵化率 52 3.3.5 孵化酶活性 53 3.3.6 基因表达分析 54 II 微囊藻毒素-LR 暴露对斑马鱼肾脏组织和子代胚胎孵化率的影响及其机制 3.4 讨论 56 4 全文总结及展望 59 4.1 全文总结 59 4.2 展望 59 参考文献 60 附录：在校期间发表论文 77 致谢 78