实验三微生物生长曲线地测定.pdf

实验三 微生物生长曲线的测定 一、实验目的目的 1、了解细菌生长曲线特点及测定原理 2 、学习用比浊法测定细菌的生长曲线 二、实验原理 将少量细菌接种到一定体积的、 适合的新鲜培养基中， 在适宜的条件下进行培养， 定时 测定培养液中的菌量， 以菌量的对数作纵坐标， 生长时间作横坐标， 绘制的曲线叫生长曲线。 它反映了单细胞微生物在一定环境条件下于液体培养时所表现出的群体生长规律。 依据其生 长速率的不同， 一般可把生长曲线分为延缓期、对数期、 稳定期和衰亡期。 这四个时期的长 短因菌种的遗传性、 接种量和培养条件的不同而有所改变。 因此通过测定微生物的生长曲线， 可了解各菌的生长规律，对于科研和生产都具有重要的指导意义。 测定微生物的数量有多种不同的方法， 可根据要求和实验室条件选用。 本实验采用比浊 法测定，由于细菌悬液的浓度与光密度（ OD 值）成正比，因此可利用分光光度计测定菌悬 液的光密度来推知菌液的浓度， 并将所测的 OD 值与其对应的培养时间作图， 即可绘出该菌 在一定条件下的生长曲线，此法快捷、简便。 三、实验材料 1、菌种 2 、培养基 ：肉膏蛋白胨培养基 3 、仪器和器具 721 分光光度计，比色杯，恒温摇床，无菌吸管，试管，三角瓶。 4 、流程 种子液 →标记 →接种 →培养 → 测定 四、实验步骤 1、种子液制备 取细菌菌种 1 支，以无菌操作挑取 1 环菌液，接入肉膏蛋白胨培养液中，培养 18h 作 种子培养液。 2 、标记编号 取盛有 30mL 无菌肉膏蛋白胨培养液的三角瓶 6 个，分别编号为 0 、4、 8、12 、16 、2 0 。 3 、接种培养 用 2mL 无菌吸管分别准确吸取 1mL 种子液加入已编号的 6 个三角瓶中，于 37 ℃下振 1 荡培养。然后分别按对应时间将三角瓶取出测定 OD 值。 4 、生长量测定 将未接种的肉膏蛋白胨培养基倾倒入比色杯中，选用 600nm 波长分光光度计上调节零 点，作为空白对照，并对不同时间培养液从 0h 起依次进行测定，对浓度大的菌悬液用未接 种的牛肉膏蛋白胨液体培养基适当稀释后测定，使其 OD 值在 0.10. ～0.65 以内，经稀释后 测得的 OD 值要乘以稀释倍数，才是培养液实际的 OD 值。 五、实验结果与分析 时间（ h ） 0 4 8 12 16 20 光密度值 （OD600 ） 以上述表格中的时间为横坐标， OD600 值为纵坐标，绘制细菌的生长曲线。 2