信号通路异常与疾病及技术方法.ppt

EMSA 十、蛋白质与核酸相互作用技术 研究细胞内蛋白质尤其是转录因子与特定核酸序列的相互作用。 反义核酸技术的应用 十一、对细胞内信号分子的干预技术 研究细胞内蛋白质尤其是转录因子与特定核酸序列的相互作用。 RNAi RNAi Figure 1. Effects of mex-3 RNA interference on levels of the endogenous mRNA. Nomarski DIC micrographs show in situ hybridization of 4-cell stage embryos. (A) Negative control showing lack of staining in the absence of the hybridization probe. (B) Embryo from uninjected parent showing normal pattern of endogenous mex-3 RNA (purple staining). (C) Embryo from parent injected with purified mex-3 antisense RNA. These embryos (and the parent animals) retain mex-3 mRNA, although levels may be somewhat less than wild type. (D) Late 4-cell stage embryo from a parent injected with dsRNA corresponding to mex-3 ; no mex-3 RNA is detected. (Templates used for interfering RNA and in situ probes were largely non-overlapping.)  十二、信号分子基因表达检测技术 研究细胞内mRNA表达水平。 Heart Brain Placenta Lung Liver Skeletal Muscle Kidney Pancreas p38 p38? p38? p38? kb 3.5- 2.5- 1.8- 2.0- Tissue distribution of mRNA of p38 isoforms p38a、b、g、d ATF2 MEF2C CHOP10 SAP1 TNF-a mRNA etc. monocyte macrophage Rt LPS MKK3 / 6 MKKKs nucleus TK CD14 PRAK sHSP Cytoskeleton ? LBP ？ THANKS FOR YOUR ATTENTION * 细胞信号转导系统概述 一、有机体细胞间通讯的方式 (一) 直接接触和粘合 (细胞粘附分子发挥重要作用) (二) 通讯连接：又分为缝隙连接和突触连接。 (三) 间接联系： 最主要的细胞通讯形式。一般包括以下几个步骤： 1．信号发放细胞合成和分泌各种信号分子。 2．靶细胞上的特异受体接受信号并启动细胞内的信号转导。 3．信号转导通路完成调节细胞代谢、功能及基因的表达。 4．信号的去除及细胞反应的终止。 二、细胞信号的种类 (一)物理信号 ：包括光信号、电信号、机械信号(磨擦力、压力、牵张力以及血液在血管中流动所产生的切应力等)。此外，紫外线、热刺激、细胞容积和渗透压改变等刺激也都是物理信号，能启动细胞内的信号转导。此外，一些物理刺激还能通过使细胞分泌化学信号启动信号转导。 (二)化学信号 │ 1．化学信号的种类 ①体液因子：如激素/神经递质/神经肽/生长因子/细胞因子/局部化学介质：前列腺素等； ②气味分子； ③细胞的代谢产物，如ATP、活性氧等； ④进入体内的药物、有毒的物质包括细菌毒素等也属于化学信号（配体）。 它们可分为水溶性和脂溶性两类，其中绝大