DNA的粗提取和分离-公开课件.pptVIP

专题5 DNA和蛋白质技术 课题1 DNA的粗提取与鉴定 课题目标 1、尝试对植物或动物组织中的DNA进行粗提取。 2、了解DNA的物理化学性质 3、理解DNA粗提取以及DNA鉴定的原理 课题重点与难点 课题重点： DNA的粗提取与鉴定方法 课题难点： DNA的粗提取与鉴定方法 一、基础知识 基本思路：用一定的物理或化学方法分离具有 不同物理或化学性质的生物大分子 DNA的性质： 1、DNA的溶解性 (1)DNA在0.14 mol／L的氯化钠溶液中的溶解度最低，利用这一原理，可以使溶解在氯化钠溶液中的DNA析出。 (2)DNA不溶于酒精，细胞中某些蛋白质则溶于酒精 3、DNA分子的鉴定 沸水浴条件下，加入二苯胺试剂，用玻棒搅拌使DNA溶解，溶液出现浅蓝色。 二、实验设计 （一）、实验材料的选取： 用什么材料提取DNA？为什么？ （教材P55提供的材料） 提示：1、材料要容易得到 2、材料中DNA含量必须丰富 方法：预实验材料对比 （一）实验材料的选取： 鸡血细胞做实验材料。原因： 1、鸡血细胞核DNA含量丰富，材料易得 2、鸡血细胞极易吸水胀破 3、植物细胞外有细胞壁，其他动物细胞制取DNA有时需匀浆和离心，对设备要求较高，操作繁琐，历时较长 （二）破碎细胞，获取含DNA的滤液 1、若是动物细胞，如何获取DNA滤液？ 旁栏思考： 2、加入洗涤剂和食盐的作用分别是？ 3、如果研磨不充分，会对实验结果产生什么影响？ （三）去除滤液中的杂质 滤液中的杂质可能有哪些细胞成分？ （四）DNA的析出与鉴定 析出： 滤液+同体积95%冷却酒精 白色丝状物 鉴定： 如何鉴定？ 对比反应是为了证明什么？ 原理？ 三、操作提示 1.以血液为实验材料，每100ml 加入3g柠檬酸钠，作为抗凝剂。 * * 讨论2：真核生物的遗传物质存在于哪里？ 讨论3：怎样才能将真核细胞内的遗传物质分离来？ 讨论1：构成生物体的遗传物质是什么？ 1、DNA的溶解性 （1）DNA在氯化钠溶液中的溶解性 随着氯化钠的浓度的变化如何改变的？ 提取生物大分子的方法： DNA的性质： 2 、对酶、高温和洗涤剂的耐受性 蛋白酶能水解蛋白质，但对DNA没有影响。大多数蛋白质不能忍受60-80度的高温，而DNA在80度以上才会变性。 洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对DNA没有影响。 旁栏思考： 1、为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？ 答：蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，再加上搅拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的破裂(细胞膜和核膜的破裂)，从而释放出DNA 2、若是植物细胞，如何获取DNA滤液？ 洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA释放；食盐有利于DNA溶解 会使细胞核内DNA释放不完全，提取DNA量变少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等 可能有核蛋白、多糖和RNA等杂质。 用高浓度的盐溶液能除去高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNA析出，能除去在低盐溶液中的杂质。因此，反复溶解与析出DNA，就能除去与DNA溶解度不同的多种杂质。 为什么反复地溶解与析出DNA，能够除去杂质？（注意：两种食盐溶液的浓度和作用） 沸水浴 DNA＋二苯胺 蓝色物 2.加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要轻 缓，以免加剧DNA分子的断裂，导致DNA分子不能形成絮状沉淀。 3.二苯胺试剂要现配现用，否则会影响鉴定的效果。 方法步骤 加入物质 目的 1 . 制备鸡血细胞液 柠檬酸钠溶液 ① 提取鸡血细胞细胞核物质 20 m1 蒸馏水 ② 2 . 溶解细胞核内的 DNA 2 m1 ／ L 的 NaCI 溶液 40 mL ③ 3 . 析出含 DNA 的黏稠物 蒸馏水 ④ 4 . 滤取含 DNA 的黏稠物 ⑤ 5 . 将 DNA 的黏稠物再溶解 2 mol ／ L 的 NaCl 溶液 20 mL ⑥ 6 . 过滤含 DNA 的 NaC l 溶液 ⑦ 7 . 提取含有杂质较少的 DNA 冷却的 95 ％的酒精 50 mL ⑧ A : (1) 向试管中加入 0 . 015 mol ／ L 的 NaCl 溶液 5 mL (2) 加入 DNA (3)4 mL 二苯胺