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;知识系统构建;;基因表达载体;;4.将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法。将目的基因导入动物细胞常用显微注射法,导入微生物细胞常用感受态细胞法(Ca2+处理法)。
5.检测目的基因是否导入受体细胞常用DNA分子杂交法;检测是否转录,常用分子杂交法;检测是否翻译,常用抗原—抗体杂交技术。
6.蛋白质工程并不是直接改造蛋白质分子的结构,而是通过基因操作来实现对天然蛋白质的改造。
7.蛋白质工程的基本途径是:从预期的蛋白质功能出发→设计预期的蛋白质结构→推测应有的氨基酸序列→找到相对应的脱氧核苷酸序列→利用基因工程技术合成新的蛋白质。;;整合一 几种重要酶的比较;作用特点;在基因工程中逆转录酶也常被使用。逆转录酶又称RNA指导的DNA聚合酶,是以RNA为模板合成DNA所需的酶。逆转录酶催化的反应叫逆转录。在这个过程中,遗传信息流动的方向是从RNA到DNA,正好与转录过程相反,故称逆转录。;
;解析 图中①是限制性核酸内切酶切割DNA分子;
②是DNA连接酶将两个DNA分子的缝隙缝合起来;
③是在解旋酶的作用下DNA分子双链解开成单链;
④为DNA复制时以解开的两条单链为模板,在DNA聚合酶的作用下合成脱氧核苷酸子链;
⑤是以DNA的一条链为模板,在RNA聚合酶作用下转录产生RNA。;整合二 易混概念辨析
基因工程的基本操作程序中存在多组易混的概念,它们是学习中的难点,只有把它们的区别和联系搞清楚,才能正确掌握关于基因工程的基本操作程序的知识。下面是对几组易混概念的辨析。;1.基因文库、基因组文库、部分基因文库
(1)从定义上区分
①基因文库:将含有某种生物不同基因的许多DNA片段,导入受体菌的群体中储存,各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因,称为基因文库。基因文库是指储存有某种生物基因的菌群的总称。
②基因组文库:如果基因文库中含有一种生物的所有基因,这种基因文库叫做基因组文库。
③部分基因文库:指含有一种生物的一部分基因的基因文库,如cDNA文库。
;(2)从范围上区分:基因文库包含基因组文库和部分基因文库。基因组文库有某一种生物的全部基因,它的范围要大于部分基因文库。
2.启动子、终止子、起始密码子、终止密码子
(1)从定义上区分
①启动子:位于编码区上游紧靠转录起点的位置。它的主要功能是引导RNA聚合酶与基因的正确部位结合。只有在启动子存在时,RNA聚合酶才能准确地从转录起点开始,沿着编码区正常地进行转录。;②终止子:位于编码区下游紧靠转录终点的位置。它的特殊的碱基排列顺序能够阻碍RNA聚合酶的移动,并使其从DNA模板链上脱离下来。
③密码子:指信使RNA上决定一个氨基酸的三个相邻的碱基。信使RNA上四种碱基的组合方式有64种,其中,决定氨基酸的密码子有61种,3种是终止密码子。 ;④终止密码子:是信使RNA上能够终止蛋白质合成的密码子。
⑤起始密码子:位于信使RNA上,是蛋白质合成开始的信号,有两种:AUG、GUG。
(2)从本质上区分:启动子和终止子都是DNA分子中具有调控作用的脱氧核苷酸序列,而起始密码子和终止密码子都位于信使RNA上,分别是翻译的起始位置和终止位置,终止密码子不能决定任何一种氨基酸。对于相似或相关概念,通过比较分析的方法找出区别与联系,会加深对这些知识的理解与掌握。;
;;1.EcoRⅠ和SmaⅠ限制酶识别的序列均由6个核苷酸组成,但切割后产生的结果不同,其识别序列和切割位点(图中箭头处)分别如下图所示,请据图分析下列说法正确的是
A.所有限制酶的识别序列均由6个核苷酸组成
B.SmaⅠ切割后产生的是黏性末端
C.用DNA连接酶连接平口末端和黏性末端的效率一样
D.细菌细胞内的限制酶可以切割外源DNA,防止外源DNA入侵 ;2;2.下面是3种限制酶对DNA分子的识别序列和剪切位点图(箭头表示切点,切出的断面为黏性末端)。相关叙述错误的是
限制酶1:—↓GATC— 限制酶2:—CCGC↓GG—
限制酶3:—G↓GATCC—
A.不同的限制酶有不同的识别序列和切割位点,体现了酶的专一性
B.限制酶2和3识别的序列都包含6个碱基对
C.限制酶1和3剪出的黏性末端相同
D.能够识别和切割RNA分子内一小段核苷酸序列的酶只有限制酶2;解析 酶具有专一性,不同的限制酶有不同的识别序列和切割位点,A项正确;
据图可知,限制酶2和3识别的序列分别是—CCGCGG—和—GGATCC—,均为6个碱基对,B项正确;
限制酶1和3剪出的黏性末端相同,均为GATC,C项正确;
限制酶只能识别特定的DNA序列,因此三种限制酶均不能识别和切割RNA中核糖核苷酸序列,D项错误。;3.下列有关基因工程的叙述,正确的是
A.DNA连接酶的作用是使互补的黏性末端之间发生碱基A与T,C与G之
间的配
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