细胞实验技术-课堂PPT-第九讲细胞培养总结.pptx

细胞培养总结;一、细胞培养技术回顾;（一）细胞培养所用制品的清洗与消毒;（二）细胞培养常用试剂;细胞培养基应用选择;3：血清;4: 平衡盐液体;PBS（Phosphate-Buffered Sallines）;5：消化液;6：pH 调整液;7：谷氨酰胺补充液;8：酚红;9：抗生素溶液;（三）、器材和液体的准备;冷冻保存细胞的解冻与复苏要点;二、细胞的原代和传代培养;原代培养——1.植块法培养;原代培养——2. 酶解组织消化、接种培养;原代细胞植块培养;贴壁生长细胞传代方法;传代细胞培养结果;二、细胞增殖检测;（一）、细胞计数及活力测定 ;细胞台盼蓝染色计数和活力测定的实验结果;（二）、CCK8 实验结果;1;2;（三）、流式细胞仪测定细胞周期;（四）、细胞分裂指数测定;（五）、EDU或BRDU标记实验;二、细胞运动检测;（一）、细胞划痕实验;（二）、TRANS-WELL实验1;（二）、TRANS-WELL实验2;二、细胞凋亡检测;流式细胞仪检测???胞凋亡;三、真核细胞转染;Transfection of eukaryotic cells;Transfection;Purpose/uses of Transfection;How it works;How it works – Chemical and lipid methods;;How it works – Physical methods;Experimental method/process(chemical methods);Advantages/Disadvantages;脂质体转染绿色荧光蛋白质粒结果;脂质体转染绿色荧光蛋白融合的目标基因表达定位在胞质;四、流式细胞术;;;;基因转染细胞的分选;What can Flow Cytometer tell us about a cell?;细胞结构 细胞大小 细胞粒度 细胞表面面积 核浆比例 DNA含量与细胞周期 RNA含量 蛋白质含量 染色体分析;直接染色;间接染色;Avidin-Biotin method I;Propidium Iodide;Cells Cycles;;A typical DNA Histogram;红色为正常二倍体细胞；黄色为异倍体细胞; 增殖相关基因; BrdUrd Incorporation; BrdUrd Incorporation;Tracing Dye(CFSE); Apoptotic Cell Death-- a genetically encoded cell death program, which is morphologically, biochemically and molecularly distinct from necrosis;Flow cytometry of apoptotic cell death;Flow cytometry of apoptotic cell death;Flow cytometry of apoptotic cell death Phospholipid redistribution;Flow cytometry of apoptotic cell death;Flow Cytometry of Apoptotic Cells