食品微生检验方法手段.ppt

第四章 食品微生物检验方法手段 在食品微生物学检验过程中，需要采用很多方法和手段。下面就几种常用的检验方法作一些基本介绍。 一、显微镜检验 在食品微生物学检验中，为了能够发现微生物或观察其形态、排列及某些结构，必须借助于显微镜。显微镜观察的微生物标本一般分为两种：染色标本和不染色标本。 （一）不染色标本的检验 在食品微生物学检验中，检验不染色标本是为了观察微生物细胞在生活时期原有的形态、大小及确定细胞能否运动等。不染色标本的基本制片方法有以下两种： 1、压滴法 在载波片上加一滴生理盐水，再在其中滴加少许要观察的含菌液体或少量要观察的固体培养物，使菌体均匀分布在生理盐水中，然后盖上盖玻片，即可进行镜检。 2、悬滴法 将待观察的含菌液体滴在盖玻片上，然后将其反扣在凹玻片上，使液滴悬挂在凹室内。 （二）染色标本的检验 染色标本是将检验标本根据检验目的，按一定的方法涂片固定，用适当的染料染色而成的标本。经过染色，微生物细胞与其背景的色差增加，镜检时更加清晰可见。染色标本除能显示微生物的形态、排列和一定的构造外，还能显示某些细胞成分的性质及其分布的位置、区别活菌与死菌、鉴定微生物的种类。 革兰氏染色法 革兰氏染色法 革兰氏染色法 二、培养检验 在食品微生物学检验中，分离培养是一项非常重要的工作，它对进一步确定微生物的种类和研究它们的特性等都具有重要意义。 微生物的接种和培养 接种工具有：接种针、环、钩、玻璃涂棒、接种圈、接种锄、小解剖刀 A 划线接种： 是最常用的接种方法。即在固体培养基表面作来回直线形的移动就可达到接种的目的。常用的接种工具是接种环、接种针。划线接种是在斜面接种和平板划线中常用的方法。 B 三点接种（点植法）： 在研究霉菌的形态时常用此法。它是把少量的微生物接种在平板表面成等边三角形的三点上，让它各自独立形成菌落来观察研究它们的形态。除三点外，还有一点或多点接种的。 C 穿刺法接种： 在保藏厌氧菌种或研究微生物的动力时常用此法。所用工具是接种针，培养基是半固体培养基。具体做法：用接种针蘸取少量菌种，沿半固体培养基中心向管底作直线穿刺，如某细菌具有鞭毛而能运动，则在穿刺线周围能够生长。 D 浇混接种（倾注法）： 是将待接的微生物先放入培养皿中，然后倒入冷却至45左右的固体培养基，迅速轻轻摇匀，这样菌液就达到了稀释的目的。待平板凝固后，置合适温度下培养，就可长出单个生物菌落。 E 涂布接种（涂布法）： 与倾注法略有不同,即先倒好平板，让其凝固，然后将菌液倒入平板上面，迅速用涂布棒在表面作来回左右的涂布，让菌液分布均匀，就可长出单个的微生物菌落。 F 液体接种： 从固体培养基中将菌洗下，到入液体培养基中，或从液体培养物中用移液管将菌液接至液体培养基中，或从液体培养物中将菌液移至固体培养基中都可称液体接种。 G 注射接种： 是用注射的方法，将待接的微生物转至活的生物体内如人或其他动物中，常见的是疫苗预防接种，来预防某些疾病。 H 活体接种： 是专门用于培养病毒或其他病原微生物的一种方法，因为病毒必须接种于活的生物体内才能生长繁殖。活体可以是整个动物也可以是某个离体的活组织如猴肾，也可以是发育的鸡胚。接种的方式是注射，也可以是拌料喂养。 在食品微生物学检验中，根据被检材料的不同和检验步骤中的要求不同，在同一种培养基上可以有不同的接种方法。在进行菌落总数测定时，用的是倾注法接种，再进行各种被检微生物得分离时，常采用划线法接种，虽然他们用的都是琼脂平板，但接种方法各异。食品微生物学检验中常用的接种方法有涂布法、划线法、倾注法、定植法、穿刺法。 倾注平板法 （2）微生物的培养 根据培养时是否需要氧气，可分为 好氧培养：这种微生物在培养时，需要有氧气加入，否则不能生长良好，实验是中斜面培养是通过棉花塞从外界获得无菌的空气。三角烧瓶液体培养多数是通过摇床震荡，使外界的空气源源不断的进入瓶中。 厌氧培养：这类微生物在培养时，不需要氧气参加。在厌氧微生物的培养过程中，最重要的一定是要除去培养基中的氧气。可采用以下方法除去氧气。 （1）降低培养基中的氧化还原电位： 常将还原剂谷胱甘肽，硫基酸盐等，加如到培养基中，即可达到目的，有的将一些动物死的或活的组织如牛心羊脑加入到培养基中，也可适合厌氧菌的生长。 （2）化合去氧法： 主要有焦性没食酸吸收氧气，用磷吸收氧气；用好氧菌与厌氧菌混合培养吸收氧气，用植物的组织如发芽的种子吸收氧气，用产生氢气与氧化合的方法除氧。 （3）隔绝阻氧： 深层液体培养，用石蜡油封存，半固体穿刺培养 （4）替代驱氧： 用CO2驱代氧，用氮气驱代氧，用真空驱代氧，用氢气驱代氧，用混合气体驱代氧 2．培养结