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食用菌总糖含量测定方法研究 　　摘要：比较香菇（Lentinula edodes）和黑木耳（Auricularia auricula）在不同水解条件下的单位质量吸光值，筛选适宜水解条件，并通过测定姬松茸（Agaricus blazei）、鸡腿菇（Coprinus comatus）和茶树菇(Agrocybe aegerita)3种食用菌的总糖含量，对筛选的水解条件进行验证；采用正交试验优化苯酚-硫酸法的反应条件；最后选用苯酚硫酸法和费林氏滴定法分别测定4种供试食用菌的总糖含量，并进行比较。试验研究表明，食用菌适宜水解条件为：30 mL盐酸，100 ℃水浴水解3 h；优化的苯酚-硫酸法反应条件为：5%苯酚1.5 mL，浓硫酸5.5 mL，反应时间15 min；苯酚硫酸法和费林氏滴定法两种方法测得的食用菌总糖含量无显著差异，因苯酚-硫酸法操作简单，且简化了前处理过程，故是国标法费林氏滴定法较理想的替代方法之一。 　　关键词：食用菌；总糖；苯酚-硫酸法 　　中图分类号：S646； Q539文献标识码：A 　　 　　食用菌是我国的一大产业，如何充分利用其资源，提高食用菌的附加值，是目前研究的重要课题之一。现已发现不少食用菌多糖具有药理活性［1~4］，且部分作为抗肿瘤药物用于临床，疗效明显［5］，因此对食用菌多糖进行深入研究具有十分重要的意义。选择适宜的总糖测定方法及测定方法的优化是食用菌多糖化学和药理研究的前提。现行国家标准《食用菌总糖含量测定方法》中，食用菌水解操作过程是加100 mL水和10 mL浓盐酸，置于100 ℃水浴中水解3 h，冷却后过滤，滤渣用100 mL水无损地洗回到圆底烧瓶中，再加浓盐酸10 mL，重复上述操作；总糖测定方法是费林氏滴定法［6］。其中水解和滴定测定过程操作繁琐，工作量大，费时费力。本试验对食用菌的适宜水解条件进行了摸索，随后对两种还原糖测定方法苯酚-硫酸法和费林氏滴定法进行了比较，在为食用菌多糖的进一步开发和利用提供了理论依据的同时，也为食用菌原料和食用菌产品质量标准的制定提供理论依据和技术储备。 　　 　　1 材料和方法 　　 　　1.1材料 　　1.1.1试验食用菌 　　“尚绿”牌香菇（Lentinula edodes）、黑木耳（Auricularia auricula）、鸡腿菇（Coprinus comatus）、姬松茸（Agaricus blazei）和茶树菇 (Agrocybe aegerita)5种食用菌干品均购于上海市农业科学院上海瑞丰农业科技有限公司闵行分公司。 　　1.1.2试剂 　　盐酸(质量分数36%)、氢氧化钠、浓硫酸、葡萄糖、重蒸馏苯酚、费林氏试剂、次甲基蓝指示剂均为分析纯。 　　1.1.3仪器 　　试验主要仪器包括Sartorius BS224S电子天平（德国赛多利斯科学仪器有限公司）、DK-S24型恒温水浴锅（上海精宏实验设备有限公司）、WFZ UV-2100型紫外可见分光光度计（尤尼柯上海仪器有限公司）、XW-80A涡旋振荡器（上海楚定分析仪器有限公司）、小型植物粉碎机（东莞隆鑫机电设备有限公司）和可调电炉（上海荣丰科学仪器有限公司）。 　　左 琦,等:食用菌总糖含量测定方法的研究 　　1.2试验方法 　　1.2.1食用菌预处理 　　将供试食用菌样品剪成长、宽约5 cm小块，在80～100 ℃干燥箱中烘干至发脆，冷却后立即用小型植物粉碎机粉碎。弃去开始粉碎出的样品（约占总样的1/10），粉碎后的样品过20目筛，未能过筛部分经烘干之后再次粉碎过筛或经钵内研磨后再次过筛，直至全部样品过筛为止［6］。 　　1.2.2食用菌水解条件 　　将经过粉碎预处理的香菇和黑木耳样品0.25 g加入100 mL蒸馏水中，再分别加入10、20、30和40 mL盐酸， 100 ℃水解3、4、5和6 h后，用漏斗过滤，以蒸馏水定容至250 mL；以文献［6］中的食用菌水解条件为对照，进行试验，再通过比较姬松茸、鸡腿菇和茶树菇3种食用菌在筛选的水解条件和对照条件下的总糖含量，对筛选的水解条件进行验证。 　　1.2.3苯酚-硫酸法最佳反应条件的确定 　　在苯酚硫酸法的相关文献中［7～9］，反应条件除了水浴温度30 ℃、比色波长490 nm、苯酚浓度5%相同外，苯酚、浓硫酸的加入体积、反应时间均不同，因此设计正交试验以确定苯酚-硫酸法的最佳反应条件，因素、水平如表1所示。以蒸馏水作参比，分别加入1 mL葡萄糖标准溶液，根据吸光值大小判断显色程度，吸光值越大显色程度越明显。 　　 　　1.2.4苯酚-硫酸法标准曲线的制备 　　分别吸取0、0.2、0.4、0.6、0.8和1.0 mL的100 mg/L标准葡萄糖溶液至10 mL具塞玻璃试管中，用蒸馏水补至