广西地方标准《解毒草药材中菊苣酸含量的测定 高效液相色谱法》（征求意见稿）.doc

ICS65.020.20 B 38 DB45 广西壮族自治区地方标准 DB45/T XXXX—2012 解毒草药材中菊苣酸含量的测定 高效液相色谱法 2012-XX-发布 2012-XX-XX实施 广西壮族自治区质量技术监督局发布 目次 前言 II 1　范围 1 2　规范性引用文件 1 3　方法原理 1 4　试剂和材料 1 5　仪器与设备 2 6　测定步骤 2 6.1　样品的制备 2 6.2　参考条件 2 6.3　测定 2 7　计算结果和表达 2 7.1　计算公式 2 7.2　结果显示 3 8　重复性 3 前言 本标准按照GB/T 1.1—2009 给出的规则起草。 本标准由广西壮族自治区卫生厅提出。 本标准由广西中药材标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：广西壮族自治区民族医药研究院、广西壮族自治区药用植物园。 本标准主要起草人：滕红丽、郭力城、梅之南、谷筱玉、周小雷、杨东爱。 本标准为首次发布。 解毒草药材中菊苣酸含量的测定高效液相色谱法 范围 本标准规定了高效液相色谱法测定解毒草中菊苣酸含量的方法。 本标准适用于解毒草中菊苣酸含量的测定。 本方法的检出限为1.8×10-5 g/100 g。 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 603 化学试剂 试验方法中所用制剂及制品的制备 GB/T 6682-2008 分析实验室用水规格和试验方法 JY/T 024 高效液相色谱方法通则 方法原理 解毒草中菊苣酸经乙醇加热回流提取，提取液经过滤后，浓缩、定容，高效液相色谱仪测定，外标法定量。 试剂和材料 一般规定 本标准所用试剂和水，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和 GB/T 6682─2008 中规定的三级水；流动相用水应符合GB/T 6682─2008 中一级水的规定。所述溶液如未指明溶剂，均系水溶液；所有试验方法中所用制剂和制品按 GB/T 603 配制。 试剂 乙醇。 甲醇：分析纯和色谱纯。 乙腈。 磷酸。 流动相：水相：0.1 %磷酸溶液，过滤，超声；有机相：乙腈-甲醇（5:1），过滤，超声。 菊苣酸标准品（分子式C15H10O7）：CAS 6151-25-3，纯度大于等于98.0％。 标准溶液 取菊苣酸标准品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含0.10mg的菊苣酸标准溶液，即得。 仪器与设备 液相色谱仪带紫外检测器，其灵敏度及稳定性应符合JY/T 024─1996中第6章的要求。 微量进样器。 分析天平：感量0.000 1 g和分析天平：感量0.001 g。 粉碎机。 滤膜： 0.45 μm ，有机相。 分样筛：三号筛，孔径0.30 mm。 水浴锅。 超声波清洗器（功率：200W、频率：40KHz）。 柱温箱 测定步骤 样品的制备 称取经粉碎过孔径的筛后的样品粉末g，精密称定，置于三角瓶中，用移液管量取50 mL 80%乙醇（分析纯）加入至三角瓶中，水浴加热回流 h，残渣定容至 mL，用0.45 μm微孔滤膜过滤，上机测定。 色谱条件 色谱柱：C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），或性能相当的色谱柱。 柱温：30℃。 流动相流速：0.85 mL/min。 梯度洗脱：有机相为乙腈-甲醇（5:1），水相为0.1％磷酸水溶液，梯度洗脱(梯度：0-30 min,20-60％A) 检测波长：360 nm。 检测灵敏度：1 AUFS。 菊苣酸理论塔板数：≥ 3 000。 测定 外标峰面积法定量X＝ As×V×ρ×100 ………………………………（1） Asd×m×1000 式中： V —— 试样溶液定容体积，单位为毫升（mL）； AS —— 试样溶液对应的色谱峰面积响应值； Asd —— 相思子碱标准溶液对应的色谱峰面积响应值； ρ —— 相思子碱标准溶液的含量，单位为毫克每毫升（mg/mL）； m —— 试样的质量，单位为克（g）。 结果表达 平行测定结果用算术平均值表示。 结果保留两位有效数字。 重复性 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。 DB45/T XXXX—2012 II DB45/T XXXX—2012 I