7-土源性线虫病检测技术_PPT课件.ppt

1 土源性线虫病检测技术 疾病预防控制中心 2 土源性线虫病的检测主要是采用病原学检查方法 病原学检查方法 粪便检查法 透明胶纸肛拭法 生理盐水直接涂片法 改良加藤厚涂片法 水洗沉淀法（钩虫卵除外） 试管滤纸培养法（钩蚴培养） （钩、蛔、鞭） （蛲） 饱和盐水浮聚法 3 改良加藤厚涂片法又称厚涂片透明法，为粪便定量或定性检查蠕虫卵的方法。 是世界卫生组织、我国推荐的，检测肠道线虫虫卵的主要方法。 基本原理：利用粪便定量或定性厚涂片，可作虫卵定量检查。经甘油和孔雀绿处理，使粪膜透明，从而使粪渣与虫卵产生鲜明的对比，便于光线透过和镜检。孔雀绿则使视野光线变得柔和，以减少眼睛的疲劳。 4 一、材料和试剂 透明液 配制方法：取蒸馏水100mL、纯甘油100mL、3％孔雀绿（或亚甲基蓝）1mL，按此比例混合均匀。也可不用孔雀绿或亚甲基蓝。 亲水性透明玻璃纸 预处理方法：取厚40μm的亲水性透明玻璃纸，剪切成大小为25mm×40mm的长方形，置于配制好的透明液中浸泡24h以上备用。 尼龙绢网 80目的尼龙绢网，裁剪成5cm×5cm大小备用。 5 一、材料和试剂 塑料定量板 规格为30mm×40mm×1mm的聚苯乙烯模板，中央孔为圆台形，其短径为3mm，长径为4mm，高1mm，容积为38.75mm3。 软性塑料刮片 规格为两头刮片型或一端刮片型，长60mm，宽6mm，厚2mm。 载玻片 规格为75mm×25.5mm，厚1.0mm～1.2mm。 其它 镊子、剪刀、记号笔、标本盒、吸水纸、光学显微镜、一次性手套等。 6 二、操作步骤 9 二、操作步骤 （六）待加藤片透明后镜检。粪膜置于30～36℃温箱中约半小时或室温25℃约1小时左右粪膜透明，无水雾后，即可镜检。 （七）镜检：将透明后的加藤片置于光学显微镜的载物台上，在低倍镜（100×）下进行镜检，仔细检查每一张片的每一个视野，必要时用高倍镜（400×）作进一步鉴定，及时在原始记录表上记录观察结果。 10 覆盖筛网 刮取粪液 示教 11 在定量孔上填上粪液 示教 12 盖上甘油玻璃纸 示教 13 14 用一张载玻片压片 示教 15 16 加藤片透明 示教 17 约半小时透明后可镜检 示教 18 二、操作步骤 （八）虫卵计数 1. 每张涂片发现的鞭虫卵、钩虫卵全片计数。 2. 每张涂片发现的蛔虫卵、肝吸虫卵原则上全片计数，但如果蛔虫、肝吸虫感染度特别高，即每个视野蛔虫卵（肝吸虫卵）多于10个，用定视野抽查法推算全片蛔虫卵、肝吸虫卵数。 19 二、操作步骤 （八）虫卵计数 按下图分布固定抽查10个视野，并算出抽查的10个视野蛔虫卵（肝吸虫卵）的平均数乘以全片的视野数，得到全片虫卵数近似值全片粪膜蛔虫卵（肝吸虫卵）总数。 20 二、操作步骤 （八）虫卵计数 计算3张加藤片的虫卵数分别为A、B、C，每克粪便虫卵数(EPG)为：(A+B+C) ×8；如只有1张加藤片则应乘以24。（1÷41.7≈24） 21 三、注意事项 亲水性玻璃纸在使用前需全部浸入透明液中，浸泡24小时以上。 刮取粪渣填入定量板必须填满全孔并抹平，压制涂片时尽量使粪便均匀展开至边缘，并避免粪渣溢出。 在定量应用中，为提高检出率，有时要求每一样本作3张加藤片。 22 三、注意事项 粪膜要均匀铺开，不宜过厚。 透明时间要适度。如透明时间短，虫卵难以发现；时间过长则虫卵变形，不易辨认。一般在室温25℃、湿度75％下，涂片放置不宜超过2小时（室温35℃时0.5小时即可）；若温度低，空气湿度大，涂片放置时间可适当延长。 总之，涂片放置的时间取决于粪样透明度，只要透明了，就应及时镜检，否则透明过度，薄壳虫卵易变形看不清楚，会造成漏检或误判。（例如：钩虫卵检查，透明时间宜短，不要超过30分钟。） 23 适用范围：适用于人体蠕虫卵的定性和定量检查，定量只适用于钩、蛔、鞭虫卵及其他吸虫卵的检查。 优点：方法简便，操作过程中虫卵不会散失，检出率比直接涂片法高。 不足：过硬和过稀的粪便不宜使用本法。泡沫状的粪便会在玻璃纸下形成许多微小气泡，妨碍镜检。 24 透明胶纸肛拭法 25 一、材料：市售透明胶带（宽约2.5CM）、载玻片、牛皮纸、圆底试管 26 透明胶带纸粘贴载玻片 27 载玻片透明胶带纸规格 28 操作步骤：1.从载玻片上取下透明胶带纸 29 操作步骤：2.将无胶的一面紧贴试管圆底， 让有胶的一面裹在外 30 操作步骤：3.用裹在试管圆底外的透明胶带纸在肛周左右转动粘压 31 操作步骤：4.在肛周粘压后，从试管上取下透明胶带纸，两端拉紧