色谱分及析法导论.ppt

第13章 色谱分析法导论 13-1 概述 13-1-1 色谱法 13-1-2 色谱法的分类 (4)其它色谱方法 13-1-3 色谱法的特点 13-2 色谱分离原理 分离过程 13-2-2 分配系数 K和容量因子k’ 分配系数 K 的讨论 2. 容量因子 k’ （分配比） 1. 分配系数与分配比都是与组分及固定相的热力学性质有关的常数，随分离柱温度、柱压的改变而变化 2.分配系数与分配比都是衡量色谱柱对组分保留能力的参数，数值越大，该组分与固定相作用力越大 3. 分配比可以由实验测得 3.分配系数与容量因子的关系 13-3 色谱图及常用术语 3.区域宽度 （2）用体积表示的保留值 5.保留值与分配系数 K 的关系 当某一组分的色谱峰值出现时,其组分的浓度应符合物料平衡: VRCm=VmCm+VsCs 同除Cm，得： VR=Vm+VsCs/Cm VR=Vm+KVs V’R=K Vs 调整保留时间与分配系数成正比 6.保留值与容量因子k’的关系 保留体积与死体积的关系可改写为： VR=VM(1+k’) tR=tM(1+k’) 7.相对保留值α 作业 13-10，13-13，13-14 * * 色谱法是一种分离、分析技术，将待测试样中的各组分进行分离，然后顺序检测各组分的含量。 叶绿素A 叶黄素 β胡萝卜素 俄国植物学家茨维特在1906年使用的装置：如右图 其中的一相固定不动，称为固定相；(CaCO3) 另一相是携带试样混合物流过此固定相的流体（气体或液体），称为流动相(石油醚) 当流动相中携带的混合物流经固定相时，其与固定相发生相互作用。 由于混合物中各组分在性质和结构上的差异，与固定相之间产生的作用力的大小、强弱不同，随着流动相的移动，混合物在两相间经过反复多次的分配平衡，使得各组分被固定相保留的时间不同，从而按一定次序由固定相中流出。 与适当的柱后检测方法结合，实现混合物中各组分的分离与检测。 两相及两相的相对运动构成了色谱法的基础 (1) 按流动相和固定相的状态分类 用气体作流动相，为气相色谱 用液体作流动相，为液相色谱 固体固定相-气固 液体固定相-气液 固体固定相-液固 液体固定相-液液 ⑵按固定相的固定方式分类 柱色谱 纸色谱 薄层色谱 ⑶按分离过程的作用力分类 吸附色谱法 分配色谱法 离子交换色谱法 排阻色谱法 超临界色谱:超临界CO2流动相 高效毛细管电泳: 九十年代快速发展、特别适合生物试样分析分离的高效分析仪器 （1）分离效率高 复杂混合物，有机同系物，异构体，手性异构体 （2） 灵敏度高 可以检测出μg.g-1(10-6)级甚至ng.g-1(10-9)级的物质量 （3） 分析速度快 一般在几分钟或几十分钟内可以完成一个试样的分析 （4） 应用范围广 不足之处： 被分离组分的定性较为困难 蛋黄中的苏丹红I图谱 苏丹红I（0.3μg/ml）的标准图谱 苏丹红I的色谱分析（1-苯基偶氮-2-萘酚 ） 瘦肉精的色谱分析 盐酸双氯醇胺 ,β-兴奋剂 裂解气色谱图 食品中防腐剂的分析 13-2-1 分离原理及过程 色谱分离过程是在色谱柱内完成的(以气液色谱为例) 气液色谱的固定相: 由 担体和固定液所组成 分离依据:固定液对试样中各组分的溶解能力的不同 分离机理:气液两相间的反复多次分配过程 当试样由载气携带进入色谱柱与固定相接触时，被固定相溶解 随着载气的不断通入，被溶解的组分又从固定相中挥发 随着载气的流动，组分溶解、挥发的过程反复地进行，微小差异被扩大，性质相近的组分得以分离 1.分配系数 K 组分在固定相和流动相间发生的吸附、脱附，或溶解、挥发的过程叫做分配过程 在一定温度下，组分在两相间分配达到平衡时的浓度比，称为分配系数，用K 表示，即： 分配系数差异是色谱分离的依据 一定温度下，组分的分配系数K越大，与固定相作用力越大 各组份在固定相上的分配系数K不同，是分离的基础 某组分的K = 0时，即不被固定相保留，最先流出 在实际工作中，也常用分配比来表征色谱分配平衡过程 分配比是在一定温度下，组分在两相间分配达到平衡时的质量比： 容量因子也称：分配比或容量比 式中β为相比 Vm 为流动相体积，即柱内固定相颗粒间的空隙体积