生化检验第五章酶要点.ppt

概念：酶的活性中心是指酶分子结构中，能与底物结合，并使底物转化为产物的具有特定空间结构的区域。 酶活性中心是酶分子中具有三维结构的区域，或为裂缝，或为凹陷，深入到酶分子内部，常为氨基酸残基的疏水基团组成的。 1、氧化还原酶（1）　AH2＋B＝A＋BH2 2、转移酶 （2）　　　AB＋C＝A＋BC 3、水解酶 （3）　　　AB＋H2O＝AOH＋BH 4、裂合酶（4）　　　AB＝A＋B 5、异构酶 （5）　　　A＝B 6、连接酶或合成酶（6）　A＋B＋ATP＝AB＋ADP＋Pi 或　 A＋B＋ATP＝AB＋AMP＋PPi 　六大类编号依次为　　　 1. 2. 3. 4. 5. 6 　亚类编号依次为　　 　　1. 2. 3. 4. 5. 6……. 　亚－亚类编号依次为 1. 2. 3. 4. 5. 6……. 概念：在酶学分析中作为试剂用于测定化合物浓度或酶活性的酶称为工具酶。 葡萄糖氧化酶法： (一)定时法（fixed time assay） （两点法） 测定酶与底物作用反应一定时间后底物或产物变化的总量，计算酶促反应平均速度。 优点：比较简单，所用仪器无需恒温装置，显色剂的选择也可不考虑对酶活性的影响。 缺点：无法知道是否处于线性期。 连续监测法的种类 L-乳酸 +NAD+ 丙酮酸+ NADH+H+ Ex 为待测酶，A为底物，B为中间产物。 A、B二物质的变化无法直接监测，此时可外加第二个酶Ei(为指示酶)，其底物为B，反应产物为C可直接测定。 方法条件的选择 尽可能采用连续监测法；减少步骤,化学试剂有一定纯度,双蒸水,使用双试剂。 测定参数的设置 方法类型、波长、样品量与试剂量、稀释水量、试剂吸光度上下限、空白速率、反应孵育时间、延迟,监测时间、底物耗尽限额、线性范围及计算因子F值。 标本的采集、运输与保存 影响因素：溶血、抗凝剂、温度等。 干扰因素的控制 反应干扰；污染；底物自行发生反应。 惯用单位 惯用单位是酶活性测定方法的建立者所规定的单位。由于单位定义不同，参考范围差别很大，难以进行比较。 国际单位（IU） 在特定的条件下，每分钟转化1?mol底物的酶量为一个国际单位。 以IU表示，1IU=1?mol/min。 Katal单位 在规定条件下，每秒钟转化1mol底物的酶量为1kat， 1kat=1mol/s。常用单位为?katal或 nkatal。 Kat与IU的换算关系为： 1IU=1?mol/min=16.67nmol/s= 16.67nkatal 2.酶活性浓度单位 临床上酶活性浓度采用每单位体积（升）所含的酶活性单位数表示。U/L 酶活性浓度单位的计算 连续监测法根据摩尔吸光系数进行酶活性浓度的计算。 公式如下： 二、酶的质量测定 利用酶蛋白分子具有抗原性的特点，可以通过抗原抗体反应的原理直接测定酶的质量，报告方式用质量浓度单位。 如用免疫学方法测定CK-MB质量，结果用ng/ml 或 ug/L报告。 ?(一)转氨酶及其同工酶 生化特性 丙氨酸氨基转移酶（谷丙）：ALT(GPT) （天）门冬氨酸氨基转移酶（谷草）：AST(GOT) 组织分布 AST:主要分布于心、肝、 骨胳肌、肾。 同工酶：细胞质ASTs；线粒体ASTm 正常血清主要为ASTs，当细胞受到轻度损伤时ASTs 显著升高。若血清中出现大量的ASTm，则表示细胞严重受损。 ALT：主要分布于肝、肾、心、骨胳肌。 有两种同工酶：ALTs、ALTm， 反映肝损伤灵敏指标. 转氨酶的测定方法 目前，国内外实验室多采用连续监测法进行测定。 转氨酶测定的临床意义 急性肝损害:ALT的升高常与病情轻重相平行，为判断急性肝炎恢复的指标。是肝坏死的前兆。 心脏、骨骼肌等组织受损、肝胆疾病时 血清ALT水平也可出现不同程度的升高。 心肌、肝脏损伤血清AST会升高。肾脏或胰腺细胞损伤，血清AST也会升高。 在AMI患者胸前区疼痛发作后6～8h，血清AST可明显升 高，发病后48～60h达峰值，4～5天可降至正常。 转氨酶 轻度增加(1～3ULN) ：胰腺炎、酒精性脂肪肝、肝硬化、肉芽肿、肿瘤等。 中度增加(3～10ULN)的疾病：传染性淋巴增多症、慢性活动性肝炎、肝外胆道梗塞、心肌梗死等。 重度增加(>20ULN)的疾病：病毒性肝炎、中毒性肝炎。 (二）肌酸激酶及其同工酶 生化特性 由两种不同亚基（M和B亚基）组成的二聚体。 同工酶分：CK-BB（