ABC-ELISA法检测牛乳过敏小鼠模型中的特异性IgE.pdfVIP

维普资讯 物 技 术 通 讯 … ． LETTERS IN BIOTECHNCLOGY volJ1·一／N一．o-3j·M一一ay， 389 111 文章编号：1009-0002(2006)03-0389—03 技术方法 ABC—ELISA法检测牛乳过敏小鼠模型中的特异性 IgE 毛露甜 ，向军俭 ，张在军 1．惠州学院 生命科学系，广 东 惠州 516007； 2．暨南大学 生命科学技术学院分子免疫学与抗体工程研究中心，广东 广州 510632 [摘要] 目的：建立并优化一种有效检测特异性IgE的方法，以取代皮 内试验快速诊断过敏症。方法：用乳清蛋 白皮下注射 BALB／c小 鼠建立牛奶过敏模型 ，获得小 鼠抗血清进行方法学研 究。结果 ：乳清蛋 白的最适包被量为 500ng，用 pH9．4的碳 酸盐缓冲液作为包被液，4℃包被过夜效果最佳，选用0．2％N 白明胶／1％的BSA封闭效果最好 ，生物素化抗 鼠IgE抗体的最 佳反应浓度为 1：1000。结论 ：建立 了检测特异性 IgE 的生物素一亲和素系统改 良的ABC-ELISA法，该法特异 、灵敏 、安全 、 简便，可用于临床 诊断过敏症。 [关键词] ABC—ELISA；食物过敏；特异性 IgE [中图分类号] R392．11 [文献标识码] B ExperimentalStudy on Detection oftheSpecific IgE in Sera of the M ilk Allergen ModelM ice by ABC-ELISA MA0Lu—tian，‘XIANG血n 帆2，ZHANGZai-jttrt。 1．DepartmentofBiology，Huizhou College ofGuangdong，Huizhou 516007；2．Molecule Immunoloyg and Antibody Engi— neeringLab，CollegeofI,ifeScienceandTechnoloyg，JinanUniversity，Guangzhou510632，China [Abstract] Objective：TodevelopandoptimizetheassayofdetectspecificIgEeffectivelywhichwouldbeusedtosub— stituteforthe prick testin clinic allergiesdiagnosis．M ethods：Allergic BALB／c modelofwhey protein had been estab— lishedbyhypodermicinjectedwiththeadjuvantofaluminum hydroxide，thenanti—selumwithhightiterofslgEwasisolat— ed ofrdetection．Results：In ABC—ELISA，the optimalcontentsofwheyprotein ofrcoating was500 ng，which wasincu— batedovernightat4℃ incarbonate-bufferedsaline(pH9-4)，thenblockedwith0-2％ gelatin／1％ BSAat37℃ ofr2hours． Afterwasheswith PBST， the blotswere incubated with biotin-ratantimouse IgE heavy chain as secondary antibody， w