现代生物制药工艺学（第二版）第十三章.ppt

13.2.1 胃蛋白酶 2.活力测定 13.2.2 尿激酶 1.结构与性质 尿激酶是专一性很强的蛋白水解酶，血纤维蛋白溶酶原是它惟一的天然蛋白质底物，它作用于精氨酸缬氨酸键，使纤溶酶原转为纤溶酶。尿激酶也具有酯酶活力。 尿激酶的pI为pH=8～9，主要部分在pH=8.6左右。溶液状态不稳定，冻干状态可稳定数年。加入1%EDTA、人血白蛋白或明胶可防止酶的表面变性作用。二硫代苏糖醇、ε-氨基己酸、二异丙基氟代磷酸等对酶有抑制作用。 13.2.2 尿激酶 2.生产工艺 （1）工艺流程 13.2.2 尿激酶 （2）工艺过程及质量控制 收尿 沉淀处理 硅藻土吸附 洗脱 除热原和色素 CMC浓缩 透析除盐 13.2.2 尿激酶 3.质量控制 (1)气泡上升法 试剂 反应系统 操作 （2）平板法 ①试剂 ②操作 13.2.3 天冬酰胺酶 1.结构与性质 天冬酰胺酶(asparaginase)是酰氨基水解酶，是从大肠杆菌菌体中提取分离的酶类药物，其商品名Elspar，用于治疗白血病。 呈白色粉末状，微有湿性，溶于水，不溶于丙酮、氯仿、乙醚及甲醇。 20%水溶液，室温贮存7天，5℃贮存14天均不减少酶的活力。干品50℃、15min酶活力降低30%，60℃1h内失活。最适pH=85，最适作用温度37℃。 13.2.3 天冬酰胺酶 2.生产工艺 （1）工艺流程 13.2.3 天冬酰胺酶 （2）工艺过程及控制要点 菌种培养 种子培养 发酵罐培养 提取、沉淀、热处理 精制、冻干 13.2.3 天冬酰胺酶 3.活性测定方法 天冬酰胺酶催化天冬酰胺水解，释放游离氨，奈斯勒试剂与氨反应后形成红色络合物，可借比色进行定量测定。取0.04mol/L的L-天冬酰胺1mL、0.5mol/L pH=8.4的硼酸缓冲液、0.5mL细胞悬浮液或酶液，于37℃水溶液中保温15min，加15%三氯醋酸0.5mL，以终止反应。沉淀细胞或酶蛋白，离心，取上清液1mL。加2mL奈斯勒试剂和7mL蒸馏水15min后，于500nm波长处比色测定产生的氨。 13.2.4 超氧化物歧化酶 1.结构与性质 （1）SOD的活性中心和构象 13.2.4 超氧化物歧化酶 （2）SOD的理化性质 对热稳定性 pH值对SOD的影响 吸收光谱 金属辅基与酶活性 13.2.4 超氧化物歧化酶 2.生产工艺 （1）牛红细胞提取Cu，Zn-SOD的工艺流程 13.2.4 超氧化物歧化酶 （2）工艺过程及控制要点 收集红细胞 溶血、去血红蛋白 沉淀、热变性 柱层析、洗脱、超滤浓缩 冷冻干燥 13.2.4 超氧化物歧化酶 3.测定方法 （1）SOD的纯度鉴定 均一性 酶比活 酶的某些理化性质 13.2.4 超氧化物歧化酶 （2）SOD活性测定 黄嘌呤氧化酶细胞色素C法 13.2.4 超氧化物歧化酶 ②微量连苯三酚自氧化法 13.2.5 组织纤溶酶原激活剂 1.氨基酸特征 13.2.5 组织纤溶酶原激活剂 2.理化性质及生物学活性 t-PA的等电点在7.8～8.6之间，最大组分等电点在8.2；其pH值在5.8～8.0时较为稳定，最适pH值为7.4。另外，tPA在枸橼酸抗凝血浆中不稳定，其活性丧失速率与温度有关。 13.2.5 组织纤溶酶原激活剂 3.t-PA的生产 (1)工艺流程 13.2.5 组织纤溶酶原激活剂 （2）工艺过程及控制要点 培养基 tPA抗体制备 抗tPA亲和吸附剂制备 细胞培养 tPA的分离 精制 第十三章 酶类药物 重要酶类药物的性质及生产方法 2 药用酶概述 1 13.1 药用酶概述 药用酶的来源和生产 2 药用酶的分类及应用 1 13.1.1 药用酶的分类及应用 1.促进消化酶类 13.1.1 药用酶的分类及应用 13.1.1 药用酶的分类及应用 2.消炎酶类 13.1.1 药用酶的分类及应用 3.与治疗心脑血管疾病有关的酶类 根据血栓的形成机制，对血栓的治疗主要涉及以下几方面：①防止血小板凝集；②阻止血纤维蛋白形成；③促进血纤维蛋白溶解。 因此，提高血液中蛋白水解酶的水平，将有助于促进血栓的溶解，也有助于预防血栓的形成。目前已用于临床的酶类主要有链激酶、尿激酶、纤溶酶、凝血酶和蚓激酶等。 13.1.1 药用酶的分类及应用 4.抗肿瘤的酶类 已发现有些酶能用于治疗某些肿瘤，如天冬酰胺酶、谷氨酰胺酶、蛋氨酸酶、酪氨酸氧化酶等。其中天冬酰胺酶是一种引人注目的抗白血病药物。它是利用天冬酰胺酶选择性地争夺某些类型瘤组织的营养成分，干扰或破坏肿瘤组织代谢，而正常细胞能自身合成天冬酰胺故不受影响。谷氨酰胺酶能治疗多种白血病、腹水瘤、实体瘤等。神经氨酸苷酶是一种良好的肿瘤免疫治疗剂。此外，尿激酶可用于加强抗癌药物如丝裂霉素(mitomycin)的药效，米曲