表面展示猪圆环病毒2型衣壳蛋白的重组杆状病毒的构建.pdfVIP

第 32卷 第4期 华南农业大学学报 VoJ．32．No．4 2011年 l0月 JournalofSouthChinaAgriculturalUniversity 0et．2011 表面展示猪 圆环病毒 2型衣壳蛋 白 的重组杆状病毒的构建 程晓亮，林文耀，叶 煜，陈筱薇，严常燕，廖 明，樊惠英 (华南农业大学兽医学院，农业部动物疫病防控重点实验室，广东广州 510642) 摘要：利用PCR方法扩增猪圆环病毒2型核定位信号区缺失的Cap蛋白基因，将其亚克隆人杆状病毒表面展示质 粒 pBACsurf-1的gp64信号肽和 gp46 成熟蛋 白之间．将此融合片段亚克隆到质粒 pcDNA3．1(+)，获得重组质粒 peDNA3．1一gp64一dCap．然后将含有 CMV启动子，gp64及 dCap的基因片段克隆到杆状病毒转移质粒 pFastBae—V，得 到重组质粒pFastBac—dCap—V．然后将此转化DH10Bac感受态细胞 ，获得的重组穿梭质粒Bacmid—dCap—V，经脂质体 转染St9细胞，获得重组杆状病毒Ac—dCap—V．该重组病毒感染Sf9细胞后可以产生典型的细胞病变，转导哺乳动物 细胞后经间接免疫荧光试验证明，该重组杆状病毒成功转导哺乳动物细胞并表达 dCap蛋 白． 关键词：杆状病毒表面展示系统；猪圆环病毒2型；dCap基因 中图分类号：$852．65 文献标志码：A 文章编号：1001—411X(2011)04—0096—05 Construction ofRecombinantBaculovirusSurface—Displayedthe CapsidProteinofPorcineCircovirusType2 CHENG Xiao—liang，LIN Wen—yao，YE Yu，CHEN Xiao·wei，YAN Chang—yan，LIAO Ming，FAN Hui—ying (KeyLabforPreventionandControlofAnimalDiseaaesoftheMinist~ofAgriculture，Collegeof VeterinaryMedicine，SouthChinaAgriculturalUniversity，Guangzhou510642，China) Abstract：Theopencapsid(Cap)proteingenewithoutnuclearlocalizationsignal(NLS)ofporcineeirco— virus2(PCV2)wasamplifiedbyPCRandsub—clonedintopBACsurf-1betweentheupstreamgp64signal sequenceanddownstresm gp64maturedomain．ThefusiongenecontainingdCapandgp64 wasinserted intopcDNA3．1(+)toconstructtherecombinantplasmidpcDNA3．1一gp64-dCap．AfragmentoftheCMV promoter—gp64一dCapfusiongenecassettewasexcisedfrom pcDNA3．1一gp64一dCap andinserted intothe baeulovirustransfervectorpFastBac-V toconsturcttherecombinantplasmidpFastBac—dCap—V．Itwasfol— lowedbythetransformationofplasmidintoEscherichiacoliDH10Baccompetentcellstoobtaintherecom- binantshuttlevectorBacmid—dCap—V．Eventually，therecombinantBacmidwastrans