(3.1)--[1.1]显微镜油镜的使用实验原理.pdf

显微镜油镜的使用

验证型

1实验目的

1.巩固普通光学显微镜的使用方法

2.学习并掌握油镜的原理及使用方法

3.观察常见微生物的形态

2实验原理

•普通光学显微镜利用光学原理把人眼所不能分辨的微小物体放大成

像，以供人们提取微细结构信息。

阿贝显微镜成像理论

•德国物理学家、光学家恩斯特·阿贝

首先从光的衍射角度研究显微镜物镜

成像过程，通过大量的实验，观察显

微镜物镜焦平面上的衍射图样，提出

显微镜物镜的二次衍射成像理论，

•并提出：

1.显微镜的分辨率存在上限，

2.微镜的分辨率和光的波长、显微镜

物镜孔径的关系式:σ=λ/（2NA）

分辨率σ的计算公式

1.σ=λ/（2NA）

2.σ=0.61λ/NA

3.σ=1.22λ/（NA（obj）+NA（cond））

•公式（1）用于自然光照明的显微镜，（2）、（3）用于电光源的

显微镜。

•σ为分辨率；λ为光线的波长；NA为物镜的数值孔径

（NA=nsina/2,n为介质的折射率,a为孔径角,即样品对物镜孔径角）

提高显微镜分辨率的方法：

•增大物镜的数值孔径

在物镜和盖玻片之间充以n较大的油，如香柏油n=1.52,不仅使n

增大，而且孔径角也增大。

•用短波长的光照射，如紫外光显微镜，电子显微镜。

•油镜的透镜很小，光线通过玻片与油镜头之间的空气时，因介质密

度不同，发生折射或全反射，使射入透镜的光线减少，物象显现不

清。

•若在油镜与载玻片之间加入和玻璃折射率（n=1.52）相近的香柏

油（n=1.515），则使进入透镜的光线增多，视野亮度增强，使物

象明亮清晰。

3实验器材

•显微镜

•香柏油、二甲苯

•擦镜纸

•细菌三型、放线菌、青霉、黑曲霉装片

4实验步骤

由十到百

先升后降

物像置中

（1）显微镜的放置与调节

•将显微镜置于平稳的实验台上，调节瞳距、光线亮度至合适

（2）低倍镜观察

•在载物台上放置标本，将镜头切换为低倍镜；

•将载物台升至最高；

•从目镜观察，将欲观察位置移至物镜正下方，适当缩小光圈，转动

粗调节器渐升降至发现物像时，改用细调节器调节到物像清楚为止。

•移动装片，把合适的观察部分移至视野中心.

（3）油镜观察

•下降载物台，将油镜转至正下方。在玻片标本的镜检部位滴上一小滴香柏油。

滴油

•从侧面注视，小心慢慢上升镜筒，使油镜浸入油香柏油中，镜头贴近装片。

下镜

•从目镜观察，旋转细调节器将载物台徐徐下降，直至视野中有物像为止。

寻像

•观察完毕，上旋镜筒。先用擦镜纸拭去镜头上的油，然后用擦镜纸蘸少许二

擦油甲苯（擦去镜头上残留油迹，最后再用干净擦镜纸擦去残留的二甲苯。

•将各部分还原，反光镜垂直于镜座，将接物镜转成八字形，再向下旋。同时

复位把聚光镜降下，以免接物镜与聚光镜发生碰撞危险。

（3）高倍镜观察

•（适用于真核生物观察，代替油镜）

•眼睛离开目镜从侧面观察，旋转转换器，将高倍镜转至正下方，注

意避免镜头与破片相撞。

•再用目镜观察，仔细调节光圈，使光线的明亮度适宜。用细调节器

校正焦距使物镜清晰为止。

4实验结果