(3.13)--[6.5]革兰氏染色 操作要点讲解.pdf

革兰氏染色

脱色时间过长假阴性

动态掌握

过短假阳性

脱色时间

最佳菌龄

菌龄大肠杆菌：22-25h

金色葡萄球菌：18-24h

革兰氏染色

三步法

•同经典四步法革兰氏染色。

制片

•用草酸铵结晶紫染色1-2min，水洗并除尽水滴。

革兰氏染色初染

三步法•用碘液,在涂片上滴加碘液，染1-2min，水洗并

媒染除尽水滴。

•滴加复红酒精溶液，染1min，水洗并吸干。镜检

脱色复染观察。

复红酒精溶液：碱性复红0.4g，95%乙醇100mL。

革兰氏染色

三步法

问题对一株未知菌种进行革兰氏染色，怎样保证结果的正确性？

原理

KOH快速鉴革兰氏阴性细菌的细胞壁肽聚糖含量低，类脂质含量高，脂多

糖、蛋白质和DNA复合物遇强碱如KOH能形成黏稠的胶冻状

定革兰氏染色物,可以拉出黏丝来。

革兰氏阳性细菌的细胞壁肽聚糖含量高，类脂质含量低。细胞

壁坚固，与强碱无以上反应,不能拉出黏丝来。

1.在干净的载玻片上滴1滴30g/LKOH溶液（约10μL）。

KOH快速鉴2.用接种环挑一环菌体涂在KOH溶液中，充分搅动。

3.10-60s后，观察菌液是否变成粘稠的胶冻状，并能随接种环

定革兰氏染色搅动方向移动，慢慢提起接种环，看是否有拉丝出现。

4.菌液变粘稠并能拉丝的为革兰氏阴性菌，不形成粘稠物仍为

悬浊液，不能拉丝的为革兰氏阳性菌。

机器学习

应用于革兰氏染色

Gram初染脱色复染

•亚甲•丙酮•碱性

Staining基蓝品红

Gram

Staining