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革兰氏染色
综合型实验
1实验目的
了解革兰氏染色
的原理
掌握革兰氏染
色的方法
2实验原理
•革兰氏染色法是细菌学中广泛
使用的一种鉴别染色法，
•1884年由丹麦医师、细菌学家
革创立。
汉斯·克里斯蒂安·约阿希姆·革兰氏
HansChristianJoachim
1853-1938
•细菌经碱性染料结晶紫染色，碘液媒染后，用酒
精脱色，在一定条件下有的细菌紫色不被脱去，
有的可被脱去，可把细菌分为两大类，前者叫做
+
革兰氏阳性菌（G），后者为革兰氏阴性菌（G
－）。
•细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种
﹢透性屏障，当乙醇脱色时，肽聚糖脱
G菌水而孔隙缩小，故保留结晶紫-碘复合
物在细胞膜上，呈紫色。
•肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不
Gˉ菌能使其结构收缩，其脂含量高,乙醇将
脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物
溶出细胞壁，番红染液复染后呈红色。
3实验材料
菌种
•大肠杆菌（Escherichiacoli）
•金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)
染液
•草酸铵结晶紫、卢戈氏碘液（1829J.G.
A.Lugol）、95%乙醇、沙黄染液（番红染液、
SaframineO）
4实验步骤
•在无菌操作条件下，用接种环挑取少量细菌于干净的载玻片上涂布均匀，在火焰上加热干
燥固定。
初染•草酸铵结晶紫染1分钟，自来水冲洗，去掉浮色。
•用碘-碘化钾溶液媒染1分钟，倾去多余溶液，水洗。
媒染
•用乙醇（95%）脱色20秒，水洗。
脱色
•用沙黄复染1分钟，镜检观察。
复染
5实验结果
菌名染色颜色染色结果
大肠杆菌
金黄色葡萄球菌
6思考题
•对于一株未知菌进行革兰氏染色，如何鉴定自己的染色操作是否正
确？
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