(22)--4.2 植物原生质体培养.ppt

;学习目标;没有细胞壁的原生质体仍然具有“全能性”，可以经过离体培养得到再生植株。;一、原生质体培养的目的;一、原生质体培养的目的;二、原生质体的制备;二、原生质体的制备;（2）预处理：

A.预质壁分离：17-20℃酶液中静置半小时，再于28—34℃保温，或将材料置于与酶液中糖浓度相同的溶液中预培养1h左右，再浸于酶液中消化即可达到质壁分离目的；

B.预培养:将除去下表皮的叶片于诱导愈伤组织培养基上培养7天，再用酶消化去壁，所得原生质体分裂频率较高；

C.暗处理:将室温下生长5—7个星期的植物材料在黑暗中放置30h以上，取其叶片制备的原生质体有活力；

D.光处理:将叶片于日光或灯光下照射2—6h令其萎蔫，利于撕除下表皮及原生质体分离；

E.低温处理:夏季应用的实验材料其萌动种子应于4℃过夜后再播种，从其植株叶片上分离的原生质体培养效果较佳。

;2、原生质的分离方法;分离原生质体最常用的酶有纤维素酶、半纤维素酶和果胶酶。不同植物对不同酶类的浓度是不同的。

通常情況下，酶液浓度越高，分离效果越好，但高浓度的酶液对于分离出的原生质体具有一定的毒害作用，影响其活力；酶液浓度不高，但酶解时间过长也会影响到原生质体的活力。因此，在酶解时应尽量避免高浓度的酶液与短酶解时间或低酶液浓度与长时间酶解。

酶处理目前常用的多是“一步法”，即把一定量的纤维素酶，果胶酶和半纤维素酶组成混合酶溶液，材料在其中处理一次即可得到分离的原生质体。

;3、原生质体的纯化

;3、原生质体的纯化

;4、原生质体活力测定

;三、原生质体培养;三、原生质体培养;三、原生质体培养;三、原生质体培养;四、原生质体融合;四、原生质体融合

;原生质体的融合方式分自发融合和诱导融合两类。

自发融合是在酶法分解细胞壁后有些原生质体彼此融合形成同核体的融合方式。此类融合的原生质体来源相同，因此，自发融合是无意义的。

诱导融合是指制备出原生质体后，加入化学诱导剂或用物理方法促使两个亲本原生质体融合，诱导融合可以是种内的，也可以是种间的，甚至是属间、科间的融合。

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