微生物检验方法验证.ppt

关于微生物检验方法验证重点议题一、法规要求二、验证目的三、检验概述四、总菌落数检查方法验证五、控制菌检查方法验证六、无菌检查方法验证第2页,共17页，2024年2月25日，星期天一、法规要求第二百二十六条试剂、试液、培养基和检定菌的管理应当至少符合以下要求：（一）试剂和培养基应当从可靠的供应商处采购，必要时应当对供应商进行评估；（二）应当有接收试剂、试液、培养基的记录，必要时，应当在试剂、试液、培养基的容器上标注接收日期；（三）应当按照相关规定或使用说明配制、贮存和使用试剂、试液和培养基。特殊情况下，在接收或使用前，还应当对试剂进行鉴别或其他检验；（四）试液和已配制的培养基应当标注配制批号、配制日期和配制人员姓名，并有配制（包括灭菌）记录。不稳定的试剂、试液和培养基应当标注有效期及特殊贮存条件。标准液、滴定液还应当标注最后一次标化的日期和校正因子，并有标化记录；第3页,共17页，2024年2月25日，星期天一、法规要求第二百二十六条（续）（五）配制的培养基应当进行适用性检查，并有相关记录。应当有培养基使用记录；（六）应当有检验所需的各种检定菌，并建立检定菌保存、传代、使用、销毁的操作规程和相应记录；（七）检定菌应当有适当的标识，内容至少包括菌种名称、编号、代次、传代日期、传代操作人；（八）检定菌应当按照规定的条件贮存，贮存的方式和时间不应当对检定菌的生长特性有不利影响。第4页,共17页，2024年2月25日，星期天二、验证目的为了使微生物学检验方法的结果准确可靠，需要对每个品种的具体检验方法进行验证。第5页,共17页，2024年2月25日，星期天三、验证概述微生物学检验方法包括：1.微生物限度检查2.无菌检查3.防腐剂抑菌效力测定总菌落数检查（回收率）控制菌检查（专属性）第6页,共17页，2024年2月25日，星期天三、验证概述微生物学检验的影响因素：1.药品本身的抑菌性2.药品中防腐剂的抑菌性3.培养基的促菌生长能力4.培养条件（温度、湿度及需氧或厌氧）5.过滤系统的材质第7页,共17页，2024年2月25日，星期天三、验证概述消除抑菌性的方法:一、化学中和法用化学中和剂中和抑菌剂，消除抑菌作用。二、稀释法降低抑菌剂的浓度以消除抑菌性。三、薄膜过滤法抑菌性产品通过滤膜时，微生物被截留在膜上，检品被过滤掉。——微生物检查法准确与否的核心是对抑菌性的有效消除第8页,共17页，2024年2月25日，星期天四、总菌落数检查方法验证环境条件：C级下的局部A级的单向流空气区域培养基种类：细菌计数营养琼脂培养基霉菌和酵母菌计数玫瑰红钠琼脂培养基酵母菌计数酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基第9页,共17页，2024年2月25日，星期天四、总菌落数检查方法验证培养基适用性检查被检培养基培养结果试验菌试验菌被检培养基上的菌落平均数不得小于对照培养基上的菌落平均数的70%菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致50~100cfu50~100cfu适宜培养条件........................第10页,共17页，2024年2月25日，星期天四、总菌落数检查方法验证方法验证——对细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证：——进行3次独立的平行试验，分别计算各组回收率。（1）试验组平皿法计数薄膜过滤法计数最低稀释级供试液1ml+2个琼脂培养基平皿试验菌50~100cfu取规定量的最低稀释级供试液，过滤，冲洗，在最后一次冲洗液中加试验菌50~100cfu，过滤。第11页,共17页，2024年2月25日，星期天四、总菌落数检查方法验证（