(6)--6真核转录分子生物学及常用技术.ppt

真核生物的转录

真核生物的转录和原核转录的不同点：(1)原核只有一种RNA聚合酶，而真核细胞有三种聚合酶；(2)启动子的结构特点不同，真核有三种不同的启动子和有关的元件；(3)真核的转录有很多蛋白质因子的介入。

1.真核生物的RNA聚合酶RNApolIRNApolIIRNApolIII分布核仁核质核质亚基种类6～138～1110～15分子量500～600550～650600～700主要产物rRNA前体mRNA前体tRNA和5SrRNA前体最适Mg离子浓度205～105～10α-鹅膏蕈碱不敏感低浓度敏感高浓度敏感Tagetitoxin不敏感高浓度敏感低浓度敏感普遍性转录因子约3种约10种至少4种

1、转录时，按5’3’方向合成RNA链；2、底物为4种三磷酸核糖核苷酸：ATP，GTP，UTP和CTP；3、不需要引物；4、需要转录因子的存在，聚合酶才能与启动子结合并诱导起始；真核RNA聚合酶的活性

RNApol执行多功能(1)识别DNA双链上的启动子；(2)使DNA变性在启动子处解旋成单链；(3)通过阅读启动子序列，RNApol确定它自己的转录方向和模板链。(4)最后当它达到终止子时，通过识别停止转录。

三种RNApol→三种转录方式三种启动子→三类基因，Ⅰ类、Ⅱ类、Ⅲ类2真核生物的启动子

RNApolⅡ的启动子结构最复杂有位于转录起始点上游的核心元件，有多种元件：TATA框，GC框，CATT框，OCT等；2.有的有远距离的调控元件存在，如增强子；3.它们的位置、序列、距离和方向都不完全相同；4.不直接和RNApol结合；需多种转录因子介入。

核心启动子近侧启动子Ⅱ类启动子

Ⅱ类核心启动子

真核启动子含有不同的组件SV40早期启动子胸苷激酶组蛋白H2B-140-120-100-80-60-40-20+1OctCCAATGCTATA

三种RNApol→三种转录转录因子转录因子→通用转录因子、基因特异性转录因子3真核生物的转录因子

3.1真核生物RNAPolII通用转录因子

真核生物RNAPolII转录起始复合物的形成

3.2基因特异性转录因子

增强子核心启动子激活因子激活蛋白结合增强子区域DNA弯曲带动激活因子靠近核心启动子辅激活蛋白将增强体和TFⅡD结合，使TFⅡD结合至启动子增强体辅激活蛋白其他转录因子和RNA聚合酶结合后，转录起始激活因子对转录的激活作用机制

?三种RNApol均没有对启动子特异序列的识别能力?转录起始过程需要很多的辅助因子(称为转录因子TF)参与,并且按一定顺序与DNA形成复合物，协助RNApol定位于转录起始点，RNA聚合酶I、II、III，分别称为TFI、TFII和TFIII4.真核生物转录的起始

UBF1TBPPolIII启动子TFIIIBTFIIICTBPRNAPolIIIPolI启动子SL1RNAPolITBPPolII启动子TFIIDTATA转录起始点