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DAN复制的酶学机制（一）
DNA的复制1、解螺旋酶2、单链DNA结合蛋白3、DNA聚合酶4、引物酶5、DNA连接酶6、拓扑异构酶参与的蛋白质因子
1、DNA解螺旋酶DnaB蛋白：通过ATP水解释放能量，作用于氢键，推动复制叉向前移动，形成单链结构状态。
2、单链DNA结合蛋白单链DNA结合蛋白（singlestrandedDNAbindingprotein,SSB)，又叫螺旋反稳定蛋白（HDP）作用：1.维持模板的单链状态。2.保护单链的完整，防止核酸酶的降解。E.coli：177个氨基酸残基四聚体。结合单链DNA的跨度约32个核苷酸单位。作用时表现为协同作用。
3、DNA聚合酶全称：依赖DNA的DNA聚合酶(DNA-dependentDNApolymerase)简称：DNA-pol活性：1.5’-3’的聚合活性。2.核酸外切酶活性。
复制的化学本质—单核苷酸的聚合（dNMP)n+dNTP→(dNMP)n+1+PPi
复制的化学反应5′至3′的聚合活性（5′→3′）pppppppPPPOH＋OHOH55γβα＋PPiN1N2N3N1N2N3′5′33′′′3’
聚合反应的特点：DNA新链生成需引物和模板；遵照碱基互补规律按模板指引合成子；新链的延长只可沿5→3方向进行。
DNA聚合酶的3′-5′外切酶水解位点3′3′5′5′错配碱基3′-5′核酸外切酶水解位点能辨认错配的碱基对，并将其水解。
DNA聚合酶5′-3′外切酶活力5′-3′核酸外切酶水解位点单链缺口5′能切除突变的DNA片段。
（1）原核生物的DNA聚合酶DNA-polⅠDNA-polⅡDNA-polⅢArthurKornberg
原核生物中的DNA聚合酶(大肠杆菌）性质聚合酶Ⅰ聚合酶Ⅱ聚合酶Ⅲ35外切活性+++53外切活性+--53聚合活性+中+很低+很高新生链合成--+
A~F323个氨基酸小片段5????核酸外切酶活性大片段/Klenow片段G~R604个氨基酸DNA聚合酶活性???5?核酸外切酶活性N端C端木瓜蛋白酶DNA-polⅠKlenow片段是实验室合成DNA，进行分子生物学研究中常用的工具酶。
DNA-polⅡ（120kD）DNA-polII基因发生突变，细菌依然能存活。它参与DNA损伤的应急状态修复。
功能：是原核生物复制延长中真正起催化作用的酶。DNA-polⅢ(250kD)9种亚基组成的不对称二聚体α、ε、θ组成核心酶，具有5??3?的聚合活性和???5?外切活性。ε亚基复制保真所必需。β亚基夹稳DNA模板，使酶沿模板滑动。γ-复合物促进全酶组装模板上，增强核心酶活性。
（2）真核细胞DNA聚合酶DNA聚合酶α、δ：真正起复制作用的酶。DNA聚合酶β、ε：有外切酶活性，主要参与DNA损伤修复。DNA聚合酶γ：线粒体复制酶。
休息一下！
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