基因诊断和基因治疗.ppt

基因治疗的体外和体内途径：载体目的基因invivoexvivo靶细胞目录四、病毒介导非病毒介导（一）治疗性基因的选择适用于单基因变异性疾病，SCID（重症联合免疫缺陷综合症），可选用腺苷脱氨酶(ADA)基因治疗。选用VEGF（血管内皮生长因子）基因治疗血管栓塞性疾病。VEGF可刺激侧支循环的建立，改善梗阻部位的血液供应。选用特定的反义核酸，封闭细胞内活化的原癌基因（如：erbB2）的表达，可抑制肿瘤生长。（二）基因载体选择载体两大类：病毒载体，非病毒载体，一般多采用病毒载体。6.基因芯片技术基因芯片（Genechip/DNAchip）又称为DNA微矩阵，是包被在固相载体上的高密度DNA的微阵列。即将许多特定的DNA片段或cDNA片段作为探针，有规律地紧密排列、固定于单位面积的支持物上。(1)基因芯片的类型：寡核苷酸芯片：采用固相原位合成技术制备的，或用传统方法合成后再固定于芯片上的寡核苷酸探针阵列。DNA微矩阵（DNAMicroarray）：将DNA探针通过自动化点样技术固定于特定的固相支持物如玻璃表面，然后再与靶序列杂交。(2)基因芯片技术的原理DNA芯片技术是将许多特定的寡核苷酸片段或基因片段有规律地排列、固定于支持物（如膜、硅片或玻璃片）上，然后通过类似核酸杂交的的方法与待测的标记样品按碱基配对原则进行杂交，再通过检测系统对其进行扫描，并用相应软件对信号进行比较和检测，得到所需的生物信息。其特点是可进行基因的高通量、大规模、平行化、集约化的信息处理和功能研究。(3)基因芯片技术的应用:疾病诊断（遗传病、肿瘤和病原体诊断）新药筛选和毒理学研究突变/多态性检测单核苷酸的多态性(singlenucleotidepolymorphism,SNP)。基因表达分析发现新基因(4)表达谱基因芯片的特点及其应用利用基因芯片可进行高通量基因表达平行分析，是基因功能研究的重要手段。对来源于不同个体（正常人与患者）、不同组织、不同细胞周期、不同发育和分化阶段、不同病变、不同刺激（包括不同诱导、不同治疗阶段）下的细胞内的mRNA或逆转录后产生的cDNA与表达谱基因芯片进行杂交，可以对这些基因表达的个体特异性、组织特异性、发育阶段特异性、分化阶段特异性、病变特异性、刺激特异性进行综合的分析和判断，迅速将某个或几个基因与疾病联系起来，极大地加快这些基因功能的确立，同时进一步研究基因与基因间相互作用的关系。目录采用表达谱基因芯片研究基因表达与传统的NorthernBlot相比有许多重要的优点：检测系统的微型化，对样品等需要量非常小同时研究上万个基因的表达变化，研究效率明显提高能更多地揭示基因之间表达变化的相互关系，从而研究基因与基因之间内在的联系检测基因表达变化的灵敏度高，可检测丰度相差几个数量级的表达情况节约费用和时间1.遗传病的基因诊断：遗传病是指由于基因发生突变所引起的、可以传给子代的疾病。遗传病包括：（1）单基因遗传病：由于单个基因座上存在着基因突变而引起的遗传病。（2）多基因遗传病：多个基因座存在基因突变。2、恶性肿瘤的基因诊断:癌基因被激活而过量表达或抑癌基因丢失可导致肿瘤发生，因此对肿瘤的诊断可检测癌基因突变或抑癌基因的突变。如：约一半以上的肿瘤都有抑癌基因P53的点突变，常见的点突变主要发生在第5、6、7、8外显子中。P53的突变的检测方法：（1）PCR-SSCP：此法可检测出发生突变的外显子。（2）DNA序列分析：可以确定点突变的位置及缺失/插入密码子的数目。基因诊断除用于细胞癌变机制的研究外，还可对肿瘤进行诊断、分类分型和愈后检测。3、致病病原体的检测:对于外源入侵的基因，一旦阐明其部分核酸序列，就可以设计引物和探针，用PCR或杂交方法来检测，其范围包括细菌、病毒、衣原体和支原体等一切微生物。基因诊断的特点是：可以其基因中的保守区做通用检测，也可以选定差异较大的基因部位做分型检测；检测的灵敏度和特异性都远高于当前的免疫学方法所需时间已达到临床要求。这对于难以培养的病毒（如HBV）、细菌（如结核、厌氧菌）和原虫（如梅毒螺旋体）等来说尤为适用。基因诊断在判断个体对某种重大疾病的易感性方面也起着重要作用。基因诊断在器官移植组织配型中的应用也日益受到重视。基因诊断在法医学中应用主要针对人类DNA遗传差异进行个体识别和亲子鉴定。SectionⅡGeneTherapy基因治疗