血液学一般检查.ppt

实验一血液学一般检查;1.血红蛋白测定---氰化高铁血红蛋白〔HiCN〕测定法;血液在血红蛋白转化液中溶血后，血红蛋白被高铁氰化钾[K3Fe(CN)6]氧化为高铁血红蛋白〔Hi〕，后者与氰离子〔CN-〕结合生成稳定的棕红色氰化高铁血红蛋白〔HiCN〕。在特定波长〔540nm〕和光径〔比色杯内径1.0cm〕条件下具有一定的吸光度，通过用标准液制备的标准曲线，可求出血红蛋白浓度来。;

[试剂]

血红蛋白转化液〔文齐氏液〕：

氰化钾〔KCN〕0.05g

高铁氰化钾[K3Fe(CN)6]0.20g

无水磷酸二氢钾〔KH2PO4〕0.14g

TritonX—1001.0ml

蒸馏水加至1000ml;[操作];3.于722分光光度计上以转化液为空白进行比色测定，波长540nm,光径1.0cm。;将HiCN标准液倍比稀释〔如50g/L、100g/L、150g/L、200g/L〕后,在所用的分光光度计上540nm处，光径1.0cm，以转化液为空白测定各稀释度的吸光度。以标准品血红蛋白含量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线,或求出换算常数K(K=ΣHb/ΣA)。那么通过待测标本吸光度值查标准曲线或用K值计算血红蛋白浓度〔Hb=K×A〕。;[参考值]

成年男性：〔120～160〕g/L

成年女性：〔110～150〕g/L

新生儿：〔170～200〕g/L

[本卷须知]

1.试剂因含氰化钾，虽浓度较低，但在配制、保存、使用中需妥善。

2.标准曲线或K值，应定期检查、校准。

3.722分光光度计的使用：转化液作空白(可共用)。透射比模式，开盖调0，闭盖调100；吸光度模式比色。;2.白细胞计数;1.血细胞计数板，盖玻片

2.血红蛋白吸管〔具有10μl及20μl刻度〕

3.1ml吸管，小试管，玻棒

4.光学显微镜;[试剂]

白细胞稀释液：2%冰醋酸

[标本来源]

EDTA-K2抗凝全血或毛细血管采血

;1.加稀释液：取白细胞稀释液0.38ml于一干净小试管中。

2.加血：用血红蛋白吸管取全血20μl，轻拭管尖外余血，准确调节血液液面至20μl处，将血红蛋白吸管插入白细胞稀释液中〔即小试管底部〕，迅速将血液放出，并用上清液吸吐两次洗净血红蛋白吸管内剩余血液。

3.溶血：混匀后室温静置，待液体变为棕褐色，即红细胞被完全破坏。

4.冲池：用一次性吸管取适量混匀的白细胞悬液充入血细胞计数池〔一次充好，液体不??外溢，不可有气泡，否那么擦净重充〕，室温水平静置2～3分钟，待细胞下沉后显微镜下计数。;5.计数：将血细胞计数盘放在显微镜载物台上，低倍镜下计数四角4个大方格内白细胞总数〔压线细胞：数上不数下，数左不数右〕

6.计算：白细胞/L=(N/4)×10×106×20=(N/20)×109;;;;白细胞计数操作步骤;[报告方式]

左上：右上：

左下：右下：

换算公式：

白细胞数〔WBC〕：__×109/L

[参考值]成人：〔4～10〕×109/L

新生儿：〔15～20〕×109/L;1、EDTA-K2抗凝全血使用前必须混匀。

2、计数盘和盖玻片在使用前需用纱布擦拭干净。

3、血红蛋白吸管内腔要枯燥，否那么会影响吸血量。

4、在稀释液转为棕褐色前方能充池计数，否那么因

RBC残存而干扰计数使结果偏高。

5、显微镜调节：光镜光圈调暗，光源可调亮，微调计数。

6、用好的器材及时清洗〔Hb吸管、计数盘、盖玻片、吸管〕;实验报告〔注意学号，报告下次实验交〕;附注