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pUC119基因的体外重组基因克隆策略CloninginM13vectors基因的体外重组b.DirectlycloningofPCRproducts基因的体外重组5’5’HindIIIEcoRIHindIIIEcoRICTTAAGCCGGGAATTCGGCCCGCGTTCGAAGCGCAAGCTTDegeneratePrimerPCR
SelectingthesequenceaminoacidsequencePhe-Leu-Pro-Ser-Ala-Lys-Trp-Ala-Tyr-Asp-Pronumberofcodons26464214224peraminoacidavoidbettersequence(b)MixedprobesynthesisAlaLysTrpAlaTyrAspProGCAAAATGGGCATACGACCCGGGTTCCTTNumberofpossibilities4x2x1x4x2x2x1=128UsinginosineasthedegeneratebaseAlaLysTrpAlaTyrAspProGCIAAATGGGCITACGACCCGTTNumberofpossibilities1x2x1x1x2x2x1=8基因的体外重组DegeneratePrimerPCR
基因的体外重组c.CloningSau3AfragmentsintoaBamHIsite基因的体外重组(a)BamHI5’-GGATCC-3’3’-CCTAGG-5’Sau3AI5’-NGATCN-3’3’-NCTAGN-5’(b)BamHI(vector)GATCCCCTAGGG(c)Sau3AI(insert)CTAGCTAGGATCGATC(d)CTAGGGGATCCCTAGGATCCAnnealVectorInsertVectorCompanyname基因的体外重组基因的体外重组MajorgroupProkaryotic/eukaryoticTypeExamplesBacteriaProkaryoticGram-veEscherichiacoliGram+veBacillussubtilisStreptomyce
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