感染性疾病的血液筛查及确认.pptVIP

感染性疾病的血液筛查及确认方法简介; 尽可能提高检测的敏感性，使之达到或接近100%，从而削减输血的残留风险，保证输血及血液制品的平安 在保证敏感性的前提下，提高检测的特异性，削减血缘的浪费 ; 免疫测定结果可能消灭假阳性 在感染性疾病血清学检验常用的定性ELISA试验中，测定样本的A值≥Cut-off （反应性），但样本中可能并不存在病原体的特异性抗体或抗原 通过确认试验证实样本中存在病原体的特异性抗体或抗原，从而排解假阳性的情况，避开献血员不必要的丢失 ; 阳性推断值（Cut-off）的设定 内源性干扰 外源性干扰 试剂质量和实验操作的不精密度 ;灰区（GREY ZONE）;灰区的确定; 补体 高浓度的非特异性免疫球蛋白 嗜异性抗体 某些自身抗体 ; 标本溶血：血红素基团有类似过氧化物的活性 标本污染：细菌的内源性酶会产生非特异性干扰 标本贮存时间过长：标本在2~8℃下保存时间过长，IgG可聚合成多聚体，在间接法ELISA测定中会导致本底过深，甚至造成假阳性 标本凝固不全：血液通常30分钟开头凝固，18~ 24小时完全凝固，日常检验时血液还没有完全凝固就分离血清，此时分离出的血清中残留部分纤维蛋白原，检测结果易造成假阳性 试剂盒原材料的纯度、组合、来源等也会造成结果的假阳性或假阴性; 测定方法的不精密度 实验操作、样本采集、样本前处理、试剂质量等诸多因素 ; 尽可能提高检测的特异性，使之达到或接近100% 在保证特异性的前提下，提高检测的敏感性，尽可能少消灭不确定的结果，避开过多的随访 ;乙型肝炎病毒（HBV）的筛查及确认; 酶免疫测定（ELISA） 放射免疫测定 荧光免疫测定 化学发光免疫测定 金标记快速免疫测定 ;敏感性：据文献报道，到目前为止在献血员中所发现的HBsAg 携带者最低含量为0.2 ng/ml。 国产ELISA试剂的敏感性水平多为0.5ng/ml左右，对极低含量的HBsAg携带者可能消灭漏检或“灰区现象” 突变株：编码HBsAg的S基因发生突变可导致HBsAg的a决定簇发生转变。如最常见的核苷酸587位发生G到A的点突变，可导致原来145位的甘氨酸残基由精氨酸残基取代，即G145R突变。突变可能明显影响HBsAg的抗原结构。a决定簇的氨基酸替换可导致其构型转变，这种转变可影响相应抗体的结合，从而消灭HBsAg假阴性结果。目前的商品试剂盒对HBsAg突变株的测定能力可归为三类：(1)突变HBsAg和野生型均可检出。(2)不能检出突变HBsAg。(3)与野生型抗原相比，突变HBsAg的检出能力明显降低 钩状效应：血液中HBsAg含量最高可达2000000 ng/ml，而HBsAg各种检测方法的线性检测范围上限均不超过50ng/ml，测定中有可能消灭钩状效应（前带现象） 特异性：目前的各种检测方法均有消灭假阳性结果的可能性，这种情况在弱反应性的标本中更为常见。因此，有必要对HBsAg测定呈现有反应性（格外是弱反应性）的标本进一步进行确认试验;我国的药典及国家药监局的新规均要求对HBsAg的测定采纳两步法（或假两步法） 采纳两步法，格外是延长酶反应的时间可有效提高检测的敏感性，削减“灰区现象” 采纳两步法可完全消除钩状效应（前带现象） 采纳两步法，也可以明显提高检测的特异性;HBsAg测定结果的解释（国外试剂盒）;HBsAg测定结果的解释（国产试剂盒）;国产试剂测定HBsAg结果的“临界范围”;为什么国内不做HBsAg确认试验;HBsAg弱反应性样本应做确认试验;HBsAg弱反应性样本应做确认试验（文献）;国产HBsAg确认试剂盒的研发及应用;HBsAg确认试验的基本原理;HBsAg弱反应性样本的确认程序;HBV的核酸检测;人类免疫缺陷病毒(HIV)的筛查及确认; 酶免疫测定（ELISA） 明胶颗粒凝集试验（PA） 金(硒)标记快速免疫测定 化学发光免疫测定 ;第1代试剂(1985年)：间接法，HIV抗原是培育纯化的全病毒抗原 第2代试剂(1990年)：间接法，使用了重组抗原或合成肽抗原，使敏感性和特异性均得到提高 第3代试剂(1994年)：双抗原夹心法，敏感性、特异性均大幅度提高。1996年消灭HIV 1/2/O试剂 第4代试剂(1998年)：同时检测HIV抗体和HIV p24抗原，使检测的窗口期进一步缩短 ;可缩短HIV抗体检测的窗口期约一周，可考虑在两次筛查中分别使用第3代和第4代试剂 第4代试剂阳性的应分别再做第3代抗体检测试剂和