新型截短侧耳素衍生物的体外抗菌活性研究.docx

? ? 新型截短侧耳素衍生物的体外抗菌活性研究* ? ? 赵 喜，王新杨，黄金华，凌 勇 （南通大学医学院药学实验室，江苏226001） 金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌是医院感染中最常见的病原菌,可以引起败血症、菌血症、呼吸道感染、人工关节感染、尿路感染、骨髓炎、伤口感染等多种疾病。随着抗生素的广泛应用，细菌的耐药性呈上升趋势，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA）和耐甲氧西林表皮葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus epidermids,MRSE)在临床上耐受多种抗菌药物。截短侧耳素是高等真菌担子菌纲侧耳素属Pleurotus mutilus和Pleurotas passeck-rianus菌种经深层培养产生的一种广谱的二萜烯类抗生素，主要对革兰阳性菌和支原体有活性作用[1]。为寻找抗耐药菌的超级抗生素，本研究拟对已合成出的C-14位处侧链上带有杂环的一系列新型截短侧耳素衍生物，进行系统抗菌活性测试，为临床应用提供更多的实验依据。 1 材料与方法 1.1 药物与菌株 阿莫西林（山东淄博新达制药有限公司，批号101224），泰妙菌素（江苏赛奥生化有限公司，批号110319），新型截短侧耳素衍生物15，16a和 16b（本实验室合成）。MRSE,MRSA,甲氧西林敏感的表皮葡萄球菌 (methicillin-susceptible Staphylococcus epidermids,MSSE)及甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌 (methicillin-susceptible Staphylococcus aureus,MSSA)菌株（临床标本分离菌株，由江苏南京鼓楼医院提供），MH培养基(北京三药科技开发公司，批号110217)；MH肉汤(北京陆桥技术有限责任公司，批号110321)。 1.2 仪器 TDR-200B型自动微生物鉴定系统 (湖南长沙天地人生物科技有限公司)；DL-CJ-1F实验医用型洁净工作台(哈尔滨市东联电子技术开发有限公司北京分公司)；DH3600AB型电热恒温培养箱(天津市泰斯特仪器有限公司)；一次性使用培养板(江苏姜堰市天力医疗器械有限公司，批号。 1.3 方法 1.3.1 药液的制备:采用微量肉汤二倍稀释法[2]：取8排12孔的一次性使用培养板，分别标记，在标号1～12孔中各加入MH肉汤培养液100 μL，在每排的第1 孔各加入原药液 100 μL(50 μg·mL-1)，将第 1 孔混匀后，抽取100 μL加入第2孔，将第2孔混匀后再抽取100 μl加入第3孔，依次倍比稀释至第10孔，将第10孔混匀后抽取100 μL弃去，第11、12孔分别作阳、阴性对照。1～10孔中药液浓度依次为：25．00、12．50、6．25、3.13、1.57、0.79、0.39、0.20、0.10、0.05 μg·mL-1。 1.3.2 菌液的制备:从已分离纯化并过夜新鲜培养的细菌平板上挑取4～5个菌落，接种于MH肉汤中增菌6 h。菌液用3 mL MH肉汤以比浊仪校正浊度至 0.5 McFarland，再用 MH肉汤稀释至 1.5×105cfu·mL-1，作为试验菌液。 1.3.3 MIC的测定:用微量加样器取100μL MRSA菌液，依次加入上述培养板第1～11孔中，使最终接种量为 5×105cfu·mL-1，37℃恒温培养 18～20 h，观察细菌生长情况，培养液澄清的为阴性 (即无细菌生长)，混浊的为阳性（即有细菌生长）。以无菌生长96孔平板的最低药物浓度为该药对该株细菌的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)。 2 结 果 阿莫西林对金黄色葡萄球菌的MIC值为4μg·mL-1，而新型截短侧耳素衍生物15，16a,16b对金黄色葡萄球菌的MIC值均小于1μg·mL-1，抑菌效果明显优于阿莫西林,见表1。 表1 新型截短侧耳素衍生物对金黄色葡萄球菌 MIC 值（μg·mL-1） 新型截短侧耳素衍生物15，16a,16b对表皮葡萄球菌的最低抑菌浓度也明显小于阿莫西林，且对MSSE和MRSE的MIC值相同，见表2。 表2 新型截短侧耳素衍生物对表皮葡萄球菌 MIC 值（μg·mL-1） 3 讨 论 截短侧耳素具有良好的抗菌活性，1951年Kavanagh等[3]首次发现、定义并分离了这种结晶状抗菌物质，把它命名为Pleuromutilin。1974年Sandoz研究所在截短侧耳素的基础上，经过半合成生成了高活性的动物专用抗生素泰妙菌素(Tiamulin)，其水溶性和抑菌效果均较截短侧耳素有较大提高，对志贺菌、克雷伯菌以及大