GA_T 1963-2021CN法庭科学 罂粟种属SSR标记检测 毛细管电泳荧光检测法.pdf

ICS 13.310CCS A 92GA中华人民共和国公共安全行业标准GA/T 1963—2021法庭科学罂粟种属SSR标记检测毛细管电泳荧光检测法Forensic science-Methods for SSR detection of species identification ofPapaver somniferum L.—Capillary electrophoresis and fluorescence method2021-10-14发布2022-05-01实施中华人民共和国公安部发布 GA/T 1963—2021前言本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由全国刑事技术标准化技术委员会(SAC/TC179)提出并归口，本文件起草单位：公安部物证鉴定中心、最人民检察院检察技术信息研究中心、毕节市公安局。本文件主要起草人：徐小玉、装黎、张颗、王白石、张瑾、涂政、叶健、高珊、刘开会、彭建雄、谢群、戈文东、倪萍、宋炳辑、李元元、祝世敏，- GA/T 1963—2021法庭科学罄粟种属SSR标记检测毛细管电泳荧光检测法1范围本文件规定了法庭科学脱氧核糖核酸(DNA)实验室通过聚合酶链式反应(PCR)扩增、毛细管电冰荧光检测鉴别果种属的材料准备、操作方法和结果判定。本文件适用于馨粟种属的检验，2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用面构成本文件必不可少的条款，其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GA/T 382—2014法庭科学DNA实验室建设规范GA/T见毒晶原植物的DNA提取二氧化硅法3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1阳性对照positive control在PCR系统中加人已知分型的模板DNA进行的对照反应，3.2明性对照negative control不含模板DNA但含有PCR系统中所有其他成分的对照反应。4原理署票成株在外观形态上与同属其他植物相似，难以准确区分，罄票幼苗吗啡含量极低，无法通过化学成分检测，本文件中的SSR基因座具有幕粟种属特异性，可以区分器票和其他检物，每个基因座在所有馨票个体中不存在扩增片段长度变化：5器材器材包括：a)移液器；台式离心机；扩增仪；(P全自动荧光分析仪。1 GA/T 1963—20216试剂试剂包括a)纯水；b)SSR基因座名称、核心序列及PCR引物荧光标记见表11表1基固座核心序列基国座核心序列标记荧光P136GAAAFAMBP13TCACCAFAMBP12VLLFAMP85VVLLHEXBP14AAATHEXc)PCR缓冲波；d)热启动TaqDNA聚合需；e)氧化镁(MgCl,)溶液;D脱氧核糖核苷三磷酸(dNTPs);g)分子量内标；h)去离子甲酰胺；i)已知罄票DNA（阳性对照）。实验室环境要求符合GA/T382—2014中第5章的要求，8操作步聚8.1DNA提取准备待扩增样本并编号，检材DNA提取方法见GA/T1160—20148.2扩增反应8.2,1取出冷赢的扩增试剂使其温度达到室温，轻弹混匀、高心。8.2.25个基因座可逐一扩增，也可在复合扩增体系中一次性扩增。可参照表2引物用量，配制引物混合物，2 GA/T 1963—2021表 2反应体系中引物信息基因座反应体系中的浓度/(μmol/L)引物参考序列扩增片段长度/bpP136*0.3F-AGAAGGAGTGTGAGATGGATGAGGR-TGACTTTCAACACCAATCTTCTCG79BP130.05F-TCAACAACGATCAGCAGGAGR-AATCTCAGCCGTCCATGAAT159BP120.6F-TTTTGCAGGTTTGGTTTTCAR-TATCAACCTTGGGCATTTCC198P850.05F-GCATTTTCTTTTGTTGACGCTTCTR-TCGAGAGAAGAAGCAGAGAGGAAG106BP140.2F-CGTGGAAATTAGGGTTTAATCGR-TTCCTGACATGCCAAGTTGA185/1978.2.3选择适当的PCR反应体系进行扩增，推荐10μL反应体系，可参照表3计算反应用量，配置PCR反应体系，表3器票种属SSR标记反应体系试剂终浓度2X PCR BufferdNTPs0.2 mmol/LMgCl,1.6 mmol/LPCR 引物0,05 μmol/L~0,6 μmol/L热启动TagDNA聚合酶0.3 U/μL纯水模板DNA0.5 ng~1.0 ng8.2.4按照计算结果混合各种成分