不同加工方法对雪峰山天麻主要成分含量的影响研究.docx

? ? 不同加工方法对雪峰山天麻主要成分含量的影响研究 ? ? ◎ 范炜平，陈妮妮，伍贤进，方 伟,3 （1.怀化学院 生物与食品工程学院，湖南 怀化 418008；2.山地生态食品精深加工湖南省普通高等学校重点实验室，湖南 怀化 418008；3.民族药用植物资源研究与利用湖南省重点实验室，湖南 怀化 418008） 天麻（Gastrodia elata）为兰科植物天麻的干燥块茎，具有息风止痉、平抑肝阳、祛风通络、神经保护、降血压和抗惊厥等功效[1-2]。天麻主要含天麻素、对羟基苯甲醇、蛋白质、多糖以及微量元素等化学成分。目前对于天麻加工方法多为蒸煮或硫磺熏蒸后干燥或直接干燥。本实验采取4种加工方法进行对比，首先是传统的煮制与蒸制工艺，其操作简单成本低，其中蒸制工艺较其他研究略有不同，是采取蒸汽灭菌锅蒸制。考虑到这2种加工方法都会使天麻与水接触后再进行干燥，所以增加直接杀青干燥方法作对比。此外，本实验还采用一种贵州民间糯米合蒸法。这4种方法较为全面且糯米合蒸法现无人研究，遂将其加入本实验进行研究，与其他几种方法进行比较，以期为雪峰山天麻的综合深加工利用提供参考。 1 材料与方法 1.1 材料和设备 新鲜天麻样品，2019年11月采自湖南省绥宁市，经怀化学院伍贤进教授鉴定为兰科植物天麻G. elata的块茎。101-3A型电热鼓风干燥箱、循环水真空泵、UV-1800紫外分光光度计和中草药粉碎机等。 1.2 天麻预处理 首先将新鲜天麻清洗晾干切片处理，取3 kg左右的天麻进行120 ℃杀青30 min、70 ℃恒温干燥箱烘干至恒重（A组）。取3组3 kg左右的天麻分别放入高压蒸汽灭菌锅蒸40 min（B组）、沸水煮24 min（C组）、放于泡了12 h的8 kg糯米中蒸90 min（D组），70 ℃烘干至恒重后粉碎，过60目筛，得到天麻样品粉末放入干燥器中备用。 1.3 多糖提取实验 每组精密称取3份干燥天麻粉末约0.25 g，放入圆底烧瓶内加150 mL 80%的乙醇混匀，将圆底烧瓶放入恒温水浴锅中进行回流，1 h后取出烧瓶趁热过滤，倒掉废弃滤液，吸取10 mL 80%的热乙醇清洗烧瓶内的残渣3次后再次过滤，将滤纸与残渣一并留在圆底烧瓶内，加入150 mL的蒸馏水再次回流1 h，取出趁热过滤后用10 mL热蒸馏水洗涤烧瓶内残渣4次，丢弃残渣将滤液与洗液合并，放冷后转移至250 mL容量瓶内并定容，摇匀待测。 1.4 蛋白质提取实验 每组精密称取3份干燥天麻粉末约0.1 g，放入干燥研钵中，加几滴磷酸缓冲液均匀研磨至匀浆后转移至平底抽滤瓶中抽滤。抽滤过后再用少许磷酸缓冲液进行冲洗再次抽滤，将滤液取出置于25 mL容量瓶中，用磷酸缓冲液定容，摇匀待测。 1.5 标准曲线绘制 1.5.1 葡萄糖标准曲线绘制 精确吸取标准溶液0 mL、0.l mL、0.2 mL、0.3 mL、0.4 mL、0.5 mL和0.6 mL分别置于7个10 mL具塞刻度试管中，蒸馏水定容至2 mL，摇匀后浸于冰水浴，分别滴加0.2%的蒽酮-硫酸溶液8 mL，摇匀，沸水浴加热10 min，再冰水浴冷却10 min，于582 nm处测定吸光值。以吸光值为纵坐标y，葡萄糖浓度为横坐标x，绘制标准曲线，得回归方程y=3.540 3x+0.039 3，r=0.999 1。 1.5.2 蛋白标准曲线绘制 在试管中分别加入 0.1 mL 0 μg·mL-1、20 μg·mL-1、40 μg·mL-1、60 μg·mL-1、80 μg·mL-1和 100 μg·mL-1的牛血清蛋白标准溶液，然后再避光加入5 mL考马斯亮蓝G-250溶液。充分摇匀后，避光静置2 min，于595 nm处测定吸光值。以吸光值作为纵坐标y，牛血清蛋白浓度作为横坐标x，绘制标准曲线，得出回归方程y=0.005 3x+0.081 4，r=0.999 1。 1.6 天麻多糖与蛋白含量测定 1.6.1 天麻多糖含量测定 精密量取上述1.3方法制得的多糖溶液1 mL，置10 mL具塞干燥试管中（平行3组），加水1 mL，摇匀，冰水浴中缓缓滴加0.2%蒽酮-硫酸各8 mL，混匀，后置于沸水浴中加热10 min，再置于冰水浴中冷却10 min，在582 nm波长处测得吸光值。将吸光值代入1.5.1回归方程，即得所测天麻样品中多糖含量。 1.6.2 天麻蛋白含量测定 精密量取上述1.4方法制得的蛋白溶液1 mL，置10 mL具塞干燥试管中（平行3组），加水1 mL，然后再避光加入5 mL考马斯亮蓝G-250溶液。充分摇匀后，避光静置2 min，于595 nm处测得吸光值。将吸光值代入1.5.2回归方程，即得所测天麻样品中蛋白含量。 1.7 天麻素与对羟基苯甲醇测定 色谱条件：色谱柱为Wondasil C