不同饵料对大口黑鲈生长性能和肠道微生物的影响.docx

? ? 不同饵料对大口黑鲈生长性能和肠道微生物的影响 ? ? 钟立强 王海骁 王明华* 张世勇 姜虎成 陈校辉* (1. 江苏省淡水水产研究所, 南京 210017; 2. 南通市农业农村局, 南通 226000) 大口黑鲈(Micropterus salmoides), 又名加州鲈,原产于北美洲, 是美国重要的养殖和休闲垂钓品种[1]。1983年引入我国广东后, 因其肉质鲜美、生长迅速、抗病力强, 迅速成为我国重要的特色淡水经济鱼类, 养殖规模和产量不断扩大, “十一五”末全国产量18.59×107kg, 十三五末增加至61.95×107kg[2,3]。大口黑鲈生性凶猛, 在自然生态系统中是顶级肉食性鱼类。因此, 我国大口黑鲈的养殖长期以海水冰鲜杂鱼作为主要饵料。然而, 冰鲜鱼饵料转化率低,需求量大, 其野蛮捕捞对近海渔业资源和生态系统造成了难以估量的损失。同时, 在养殖过程中长期大量的冰鲜鱼投喂也给养殖水体带来了巨量的有机质和营养盐, 导致养殖池塘水体富营养化。此外, 冰鲜鱼投喂存在将海水致病微生物和病毒带入养殖池塘的风险, 给大口黑鲈养殖产业带来巨大损失的虹彩病毒(Ranavirus)就可能来自海水冰鲜鱼[4]。随着国家推进渔业供给侧结构性改革, 实现水产绿色健康养殖的迫切要求, 加快转变水产养殖方式、持续改善养殖生态环境、提升产业发展质量、全力推进水产养殖业绿色发展的目标已经势在必行。2020年, 农业农村部决定实施的水产绿色健康养殖“五大行动”中, 配合饲料替代幼杂鱼行动方案就包含在内[5]。大口黑鲈养殖配合饲料取代冰鲜鱼已经在各主养省份强力开展, 初步统计, 全国配合饲料替代率平均已超70%。生产一线调研发现, 冰鲜鱼和配合饲料投喂池塘的产量相当, 配合饲料投喂的鱼相对规格整齐, 但冰鲜鱼投喂池塘会有一部分鱼摄食能力强, 生长快, 可以提前上市, 获得更高的养殖边际收益。因此, 配合饲料完全替代幼杂鱼的行动存在一定的经济效益阻力, 依然需要加大推进力度。 大口黑鲈配合饲料的前期研究主要关注于营养需求和饲料配方[6—10], 目的是更好地改进饲料,提高转化效率。配合饲料投喂对大口黑鲈生长[11—15]、肌肉营养组成[12,13,16]、免疫和消化功能[11,13—15]的研究已经广泛开展。研究表明饵料能改变鱼类的肠道菌群[17,18], 并通过微生物-肠-脑影响鱼类的免疫和生长[19,20]。大口黑鲈的投喂研究表明, 与冰鲜杂鱼相比, 人工配合饲料降低了大口黑鲈肠道菌群多样性, 也抑制了拟杆菌等有益菌在大口黑鲈肠道内的分布[21]。但是该研究采用的变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)技术, 对于肠道菌群只能定性研究,且菌群识别度也存在一定的缺陷。因此, 本研究通过对肠道菌群的16S rRNA的V3?V4区进行Illumina测序, 探讨冰鲜鱼和配合饲料对大口黑鲈生长性能和肠道菌群的影响, 以期为大口黑鲈配合饲料改进和冰鲜鱼替代提供参考。 1 材料与方法 1.1 试验设置 试验在江苏省淡水水产研究所浦口基地开展,选择标准化养殖池塘6个(面积0.3公顷左右, 水深1.5 m)。5月初, 按22500 条/公顷的密度投放5 cm左右的大口黑鲈苗。试验设冰鲜鱼组(B)、配合饲料组(S)和冰鲜鱼配合饲料混合组(H), 每组2个重复。每日早晚两次投喂, 首月配合饲料投喂量为鱼体重4%, 之后逐步下降, 9—10月投喂量为2%, 冰鲜鱼投喂量为配合饲料的4倍, 混合组上午投喂配合饲料,下午投喂冰鲜鱼。配合饲料为加州鲈膨化配合饲料(浙江欣欣天恩水产饲料股份有限公司), 饲料成分和营养组成为: 粗蛋白≥45.0%, 粗脂肪≥10.0%,粗纤维≤5.0%, 粗灰分≤16.0%, 水分≤10.0%, 总磷=1.0%—3.0%, 赖氨酸≥2.5%。 1.2 样品采集 试验养殖周期5个月, 期间所有池塘开展正常养殖管理。10月中旬养殖试验结束, 饥饿24h后, 每口池塘旋网随机捕捞15尾个体(每组30尾), 测量体长、体重, 用解剖剪沿肛门向上朝前呈弧形剪开腹腔, 完整取出内脏, 测量内脏、肝脏和鱼体空壳重。 每个试验组取5尾鱼, 用消毒后的解剖剪将肠道剪下, 置于酒精消毒过的解剖盘, 酒精棉擦拭肠管外壁后, 收集肠道内容物, 液氮速冻后, –80℃超低温冰箱保存备用。采水器采集每口池塘3处表层的50 cm水样, 放入灭菌塑料瓶。水样放入4℃保温箱带回实验室, 分析时样品为每组6个点水样的混合样。取300 mL混合水样经0.22 μm的聚碳酸酯膜(Millipore, Cork, Ireland)负压过滤, 得到3组滤膜样品(ST), 置于2 mL的无菌离心管, ?80℃超低温冰箱冷冻保存。 1.3 DNA提取和PCR扩增 水样滤膜剪