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第二章 组织切片技术 在取材后，经固定的标本如组织块较厚则应进行修整。有条件的应根据组织块大小分别进行脱水、透明、浸蜡和包埋，包埋好的组织块即可按需要进行切片。 ? 第一节 组织的脱水、透明、浸蜡 第二节 组织的包埋和包埋方法 第三节 组织切片法 * ppt课件 第一节 组织的脱水、透明、浸蜡 一、脱水 二、透明 三、浸蜡 四、骨和含钙组织脱钙法 * ppt课件 一、脱水 脱水是借某些溶媒置换组织内水分的过程。组织经固定和水洗后含大量水分，水与石蜡不能混合，因此在浸蜡和包埋前必须进行脱水。脱水剂必须能与水以任意比例混合，至于选用何种脱水剂，应根据固定剂的要求，不要任意选用，否则无法得到满意结果。现将一些常见脱水剂及其性能和注意事项简介如下： (一) 酒精 (二) 丙酮 （三）异丙醇 （四）正丁醇和叔丁醇 * ppt课件 (一) 酒精 是最常用的脱水剂之一。它可与水随意混合，脱水能力较强，并且可硬化组织。酒精的穿透速度很快，对组织有较明显的收缩作用。为避免组织过度收缩，在用酒精作为脱水剂时，应从低浓度开始，然后再依次增加其浓度。一般从70％酒精开始，经80%、90％、95％酒精，尔后至无水酒精。对于少数柔嫩组织应从50％或30％酒精开始脱水。但也应注意，对于一些需特殊处理的标本，如进行糖原和尿酸盐结晶染色的标本，为较好的保存物质的结构（它们在水中会溶解消失），应直接用无水酒精固定。经无水酒精固定的组织，更换一次无水酒精脱水即可。一般情况下，组织经上述处理，即可达到脱水要求。但大量组织块同时进行脱水时，为达到满意的脱水效果，常经过95％酒精和无水酒精各两次。但注意组织块在纯酒精中放置时间不宜过长，防止组织过度硬化造成切片困难。无水酒精经应用后，很难保证无水，因此应在无水酒精容器内加人硫酸铜吸收水分。硫酸铜遇水变蓝后，即应更换无水硫酸铜或更换纯酒精。但放人容器的硫酸铜最好不要与组织块接触，可在硫酸铜表面加一块滤纸。对于标本量较大的单位，应经常更换酒精，对于标本量少，又不经常进行切片的基层单位，可用以上方法。 脱水的时间与组织块大小有关，对于1.5 cm×1.5 cm×0.2 - 0.3 cm的组织块，一般脱水时间如下： 70％酒精数分钟，80％、95％、95％、100％、l00％酒精各2 - 4 h，将酒精在温箱加温可缩短脱水时间。 对于小块组织，80％ - 100％酒精30 - 45 min即可。 但对于结构紧密的组织（如致密结缔组织等）和大块组织则不适用，应根据具体情况进行调整。另外，脂肪组织和疏松结缔组织应延长脱水时间，在95％酒精中水分必须洗净，脂肪必须溶解掉。否则石蜡不能渗入脂肪细胞和纤维组织，无法切出好的切片，而且染色时也容易脱片。这样的组织蜡块，因含有水分，经与空气接触后即干燥出现凹陷。 * ppt课件 (二) 丙酮 丙酮的脱水作用与酒精相似，但对组织块的收缩作用比酒精更严重，因此一般很少单纯应用丙酮作脱水剂。在快速脱水或固定兼脱水时有时应用，脱水时间约l-3 h。丙酮可作为染色后的脱水剂，用于DNA和RNA染色。 * ppt课件 （三）异丙醇 是酒精的良好代用品，不含水，可代替无水酒精使用。脱水后组织收缩小，对组织的硬化作用也较弱。对火棉胶和染料不溶，因此不能用于火棉胶包埋和染料配制。在常规制片中很少应用。 * ppt课件 （四）正丁醇和叔丁醇 正丁醇是无色液体，脱水能力较弱，可和水、酒精和石蜡混合，因此这种脱水的组织块可直接浸蜡和包埋。叔丁醇无毒，可与水、酒精、二甲苯混合。可单独使用，也可与酒精混合使用，是目前常用的一种脱水剂。与正丁醇相比，它不易使组织收缩或变硬，而且脱水后可不经透明直接浸蜡，浸蜡前先经过叔丁醇和石蜡1:1混合液。电镜标本制作时常用作中间脱水剂。 * ppt课件 二、透明 为使石蜡能浸人组织块，组织脱水后，必须经过一种既能与酒精相混合，又能溶解石蜡的溶剂，通过这种溶剂的媒介作用，而达到石蜡浸入组织块的目的。在这一过程中，因组织块中的水分被溶剂（如二甲苯）取代，其折射指数接近于组织蛋白的折光指数，组织块变得透亮，因此称之为透明。组织染色后，也要进行透明。用作透明剂的有二甲苯、苯、甲苯、氯仿、环己酮等。 ? （一）二甲苯 （二）苯和甲苯 （三）氯仿 * ppt课件 （一）二甲苯 是常用的透明剂，其折射指数（refractive index，RI）为1.50。它对组织的收缩性强，易使组织变硬变脆。因此，组织块（3-4mm）在二甲苯中一般30 min即