DB21_T 2872-2017细菌常见主要耐药基因检测技术.pdf

ICS 11.220 B 41 备案号：58555-2018 DB21 辽 宁 省 地 方 标 准 DB21/T 2872—2017 细菌常见主要耐药基因检测技术 Detection techniques of common major resistance genes in bacteria DB21/T 2872—2017 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009 给出的规则起草。 本标准由辽宁省动物疫病预防控制中心提出。 本标准由辽宁省畜牧兽医局归口。 本标准起草单位：辽宁省动物疫病预防控制中心，辽宁省动物医学研究院。 本标准主要起草人：赵凤菊，顾贵波，关淼，李清竹，梁乔，李井春，何利昆，李璐，付鹏升，王 竹，李红魁。 II DB21/T 2872—2017 细菌常见主要耐药基因检测技术 1 范围 本标准规定了细菌常见主要耐药基因的PCR检测技术要求。 本标准适用于在生物安全Ⅱ级（BSL-2）以上的实验室进行细菌四环素类、喹诺酮类、氨基糖苷类、 磺胺类及氯霉素类主要常见耐药基因的检测及gyrA、gyrB、parC和parE基因的突变分析。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 16548 病害动物和病害动物产品生物安全处理规程 GB 19489 实验室 生物安全通用要求 GB/T 19495.2 转基因产品检测 实验室技术要求 中华人民共和国农业部公告第302号（《兽医实验室生物安全技术管理规范》） 3 缩略语 下列缩略语适用于本标准。 DNA：脱氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid） DNase：脱氧核糖核酸酶（deoxyribonuclease） bp：碱基对（base pair） PCR：聚合酶链式反应（polymerase chain reaction） dNTP：脱氧核糖核苷三磷酸（deoxy-ribonucleoside triphosphate） Taq酶：Taq DNA聚合酶（Taq DNA polymerase） TE缓冲液：TE缓冲液（Tris-EDTA buffer solution） TAE：三羟甲基氨基甲烷-乙酸电泳缓冲液（Tris acetate-EDTA buffer） 4 原理 根据细菌tet （A）、tet （B）、tet （C）、tet （M）、gyrA、gyrB、parC、parE、aac （6’）-Ib-cr、 aac （3）-IV、aacC4、sul1、sul2、dfrA1、cmlA和cat1等常见的主要耐药基因序列设计特异性引物， 在DNA聚合酶催化下，以母链DNA为模板，以引物为延伸起点，通过变性、退火和延伸，体外复制出与母 链模板DNA互补的子链DNA。 5 仪器和器材 5.1 高速台式冷冻离心机（离心范围0～20000r/min） 1