高糖状态下NLRP3炎症小体在人肾小管上皮细胞中的表达变化及意义.pdf

摘要 摘 要 目的： HK-2 探讨培养人肾小管上皮细胞 （ ）在不同浓度及不同时间点高糖刺激下 NLRP3 的表达，并使用传统药物血管紧张素抑制剂ARB 及新型NLRP3 小分子 抑制剂MCC950进行干预后检测NLRP3 及其信号通路、间质纤维化mRNA 及 蛋白的表达变化。初步探讨糖尿病肾病的可能免疫机制，为糖尿病肾病的治疗 提供新的思路。 方法： 1、探讨NLRP3在高糖或高渗刺激条件下的差异性表达 HK-2 3 (Con 5.6mmol/L ) (Ma 细胞分为 组：低糖对照组 ， 葡萄糖 、甘露醇组 ， 5.6mmol/L 葡萄糖+34.4mmol/L 甘露醇)和高糖组(HG，40mmol/L 葡萄糖)，培 48h NLRP3 养 初步探讨高糖或高渗对 表达的影响。 2、探讨NLRP3在不同葡萄糖浓度下的差异性表达 HK-2 细胞分为3 组：低糖对照组(Con，5.6mmol/L 葡萄糖)、20mmol/L 葡 40mmol/L 48h NLRP3 萄糖和 葡萄糖，培养 初步探讨在不同浓度葡萄糖刺激下对 表达的影响。 3、探讨传统药物血管紧张素抑制剂ARB 对NLRP3及其信号通路、间质纤 维化相关指标的作用机制 HK-2 3 Con HG HG+ HG+ARB , 细胞分为 组： 组、 组、 厄贝沙坦组 （ 组） 分别培养24h、48h、72h，用qPCR 及WB 检测NLRP3、胱冬肽酶-1（Caspase-1）、 B(NF-B)P65 Vimentin N- (N-cadherin) 核因子 、波形蛋白 （ ）、 钙粘蛋白 ，免疫 荧光检测Vimentin 的表达。 4、探讨NLRP3抑制剂MCC950对NLRP3及其信号通路、间质纤维化相关 指标的作用机制 HK-2 3 Con HG HG+MCC950 细胞分为 组： 组、 组、 组 （干预前提前加入 MCC950，且高糖干预时间内不撤），分别培养24h、48h、72h，用qPCR 及 WB NLRP3 -1 Caspase-1 B(NF-B)P65 检测 、胱冬肽酶 （ ）、核因子 、波形蛋白 Vimentin N- (N-cadherin) Vimentin （ ）、 钙粘蛋白 ，免疫荧光检测 的表达。 II 目录 目 录 1 1 第 章 前言 2 4 第 章 材料与研究方法及步骤 2.1 材料4 2.1.1 细胞株4 2.1.2 主要试剂及仪器4