经典液相色谱法平面色谱分析.pptVIP

b.点样量和点样工具 点样毛细管，微量注射器 点样量一般以几微升为宜，毛细管大约1cm左右。点样斑点直径以2~4mm为宜。 当前31页，总共61页。 c.点样方法 吸取一定量的样液，轻轻接触于薄层的点样线上，点样线一般距薄层底边 1.5~2cm，点间距约0.8~1.5cm(新药典规定为1.5~2.0 cm)。点样后形成的原点面积越小越好，一般原点直径不超过2~4mm为宜。 当前32页，总共61页。 展开和展开剂的流速 展开 先预饱和。展开前，将薄层板置于盛有展开剂的色谱缸内饱和15～30min,此时薄板不与展开剂直接接触，当色谱缸内展开剂蒸汽、薄层与缸内大气达到动态平衡时，即饱和时，再将薄层板浸入展开剂中，称预饱和。 当前33页，总共61页。 边缘效应： 指点在薄层板上的同一物质，薄板边缘的Rf值高于中部的Rf值的现象。 当前34页，总共61页。 当前35页，总共61页。 展开剂的流速Uf 当前36页，总共61页。 当前37页，总共61页。 实际情况比上面分析的要复杂的多。总之，薄层色谱过程中展开剂的流速是空间、时间的复杂函数。 当前38页，总共61页。 显色 显色方法： a.在日光下观察，划出有色物质的斑点位置。 b.在紫外灯下观察有无暗斑或荧光斑点，并记 录颜色、位置、强弱。能发荧光的物质或少数有紫外吸收的物质可用此法检出。 当前39页，总共61页。 c.荧光薄层板检测。 d.显色剂显色。适用于无色，又无紫外吸收的物质。薄层色谱常用的通用型显色剂有碘、硫酸溶液、荧光黄溶液等。 当前40页，总共61页。 18.5.3 定性和定量分析 定性分析 依据：Rf值。 用已知标准物质作对照，在多种展开系统中比较Rf值的大小。 或与其它分析方法联用。 当前41页，总共61页。 定量分析 洗脱法 用溶剂将斑点中的组分洗脱下来，再用适当的方法进行定量测定。 斑点需预先定位。 当前42页，总共61页。 直接定量法： 目视比较法： 将一系列已知浓度的对照品与试样溶液点在同一薄层板上，展开并显色后，… 当前43页，总共61页。 薄层扫描法： 用一定波长、一定强度的光束照射薄层上的斑点，用仪器测量照射前后光束强度的变化，从而求得物质含量的方法。精密度为±5%。 双波长型薄层扫描仪 测定方法：透射法和反射法。 扫描方法：线形扫描和曲折形扫描 当前44页，总共61页。 λ1 λ2 CH L P PM PM 双波长薄层扫描光学线路示意图 当前45页，总共61页。 18.5.4 高效薄层色谱法 (high performance thin layer chromatography；HPTLC) 高效薄层色谱的分离效率比经典薄层色谱提高三倍，每分钟可分离5个以上组分，最多可分离40种组分。检出灵敏度提高，分析时间缩短。 高效薄层色谱法与经典薄层色谱法在吸附剂粒度等方面不同。 当前46页，总共61页。 表：TLC与HPTLC的比较 参数 TLC HPTLC 板尺寸(cm) 20×20 10×10 颗粒直径(μm) 10 ~ 40 5,10 颗粒分布 宽 窄 点样量(μl) 1 ~ 5 0.1~0.2 有效塔板数 >600 >5000 展开距离(cm) 10 ~ 15 3 ~ 6 展开时间(min) 30 ~ 200 3 ~ 20 最小检测量：吸收(ng) 1 ~ 5 0.1 ~ 0.5 荧光(pg) 50 ~ 100 5 ~ 10 当前47页，总共61页。 18.6 纸色谱法 当前48页，总共61页。 经典液相色谱法平面色谱分析演示文稿 当前1页，总共61页。 （优选）经典液相色谱法平面色谱分析 当前2页，总共61页。 薄层色谱法： 将固定相均匀涂布在表面光滑的平板上，形成薄层而进行色谱分离和分析的方法。 按分离原理又可分为： 吸附薄层色谱法 分配薄层色谱法 分子排阻色谱法 当前3页，总共61页。 纸色谱法： 将固定相放在纸上，以纸做载体进行点样、展开、定性、和定量的液-液分配色谱法。 20世纪40年代 产生 应用于生化医药学方面的微量分析。 20世纪60年代后， 应用减少。 当前4页，总共61页。 薄层电泳法