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乌龟抗氧化损伤及SIRT6基因在抗氧化中的功能研究 摘 要 Reactiveoxygen species ROS 氧化应激是由细胞过度产生的活性氧 （ ， ）和亲 电体引起的，被证明是衰老的主要诱因之一。SIRTUIN 蛋白家族是一类烟酰胺腺 NAD+ 嘌呤二核苷酸 （ ）依赖的组蛋白去乙酰化酶，在不同的生化过程中具有重 要的调节作用，其中SIRT6 蛋白在DNA 修复、端粒酶功能、基因组稳定性和细 胞衰老中起着重要作用。龟类以其超长的寿命以及对恶劣环境抵抗能力强为研究 者所关注，研究显示龟类对重金属具有极强的抵抗能力，转录组测序表明，在不 同年龄的乌龟体细胞中，编码端粒酶的相关基因活性很高，推测其与龟类抗衰老 有关，但有关龟类抗氧化应激能力的研究尚未见报道。本研究拟探讨在氧化应激 条件下乌龟的抵抗能力，以及SIRT6基因参与NRF2抗氧化应激通路的调控过程。 主要研究结果如下： 1 SIRTUIN RT-PCR 、 基因家族的进化分析。采用 技术克隆测序了乌龟 SIRTUIN 基因家族相关基因的编码区序列，使用相关软件对SIRTUIN 蛋白基本 物理特性、不稳定系数等进行预测；比较分析了SIRT6 蛋白二级和三级结构。采 用MEGA5.0对龟类及其他物种的SIRT6 蛋白氨基酸序列进行比对，分别用邻接 法、最大似然法和贝叶斯法构建无根系统进化树。所有结果均表明龟类SIRT6 蛋白在结构和进化上十分保守，推测其在龟类细胞中也有相似的功能。 2、乌龟抗氧化能力的研究。对乌龟成体腹腔注射不同浓度过氧化氢(H O ) 2 2 4 溶液，以建立氧化损伤模型。实验设置对照组、损伤组 （个浓度）和损伤恢 30 60 3 0.65% 复组 （ 天和 天两组），每组 只。对照组腹腔注射 无菌生理盐水， 1.5% 4.5% 9% 15% H O 48 损伤组腹腔分别注射 、 、 、 浓度的 2 2 溶液，并于注射后 9% H O 30 60 小时取肝脏组织；恢复组在腹腔 的 2 2 溶液后，于 、 天取肝脏组织， 用于后续的分析。 9% 15%H O 损伤组肝脏组织的观察发现， 、 2 2 溶液处理使肝脏出现了病变斑 HE 块、出血点等明显的病理形态；组织切片 染色可见肝脏细胞出现了淤血、细 9% 15% 胞变形及色素沉淀。肝脏组织氧化应激损伤标志物的含量测定显示， 、 H O T-SOD (P 0.05) 9% 15%H O 2 2 处理组 活力与对照组相比均呈显著下降 ， 、 2 2 处 理组CAT 活力、MDA 和GSH-PX 含量与对照组相比均呈显著增长(P 0.05)。