色谱法原理概述.pptx

色谱法概述;一、初识;色谱法就是一种将目标物与干扰物分离的技术;一、初识; 研究植物叶子的组成时，他将植物色素的石油醚浸取液通过填充有碳酸钙的直立玻璃管，再用纯净的石油醚自上而下淋洗，随着淋洗的进行，发现不同色素向下移动的速度不同，最后色素中各组分互相分离，形成不同颜色的谱带。;;三、色谱法的发展;离子交换柱色谱;离子色谱;毛细管电泳法;三、色谱法的发展; 速率理论——目标物在色谱柱中的运动情况——动力学;涡流扩散;色谱法是一种将目标物与干扰物分离的技术，是一种兼顾分离与定量分析的手段。;四、色谱法概念、原理;四、色谱法概念、原理;四、色谱法概念、原理;四、色谱法概念、原理;五、色谱法分类;五、色谱法分类;超临界流体;五、色谱法分类;柱色谱法：将固定相装在一金属或玻璃柱中或是将固定相附着在毛细管内壁上做成色谱柱，试样从???头到柱尾沿一个方向移动而进行分离的色谱法。 纸色谱法：利用滤纸作固定液的载体，把试样点在滤纸上，然后用溶剂展开，各组分在滤纸的不同位置以斑点形式显现，根据滤纸上斑点位置及大小进行定性和定量分析。以吸附水分的滤纸作固定相 薄层色谱法：将适当粒度的吸附剂作为固定相涂布在平板上形成薄层，然后用与纸色谱法类似的方法操作以达到分离目的。以涂敷在玻璃板上的吸附剂作固定相 ; 吸附色谱法 分配色谱法 离子交换色谱法 尺寸排阻色谱法 亲和色谱法 生物色谱法;（1） 吸附色谱法：用固体吸附剂作固定相，根据样品中不同组分在吸附剂上的物理吸附性能的差异进行分离。如气固色谱法、液固色谱法。;五、色谱法分类;五、色谱法分类;五、色谱法分类;五、色谱法分类;五、色谱法分类;五、色谱法分类;五、色谱法分类;（6）生物色谱法：采用各种具有生物活性的材料（例如：酶、载体蛋白、细胞膜、活细胞等）作固定相，利用固定相与各种生物活性物质的选择性结合进行分离。;五、色谱法分类;六、色谱填料;六、色谱填料;六、色谱填料;六、色谱填料;六、色谱填料;六、色谱填料;六、色谱填料;六、色谱填料;六、填料;六、色谱填料;六、色谱填料;六、色谱填料;六、填料;六、填料;六、填料;六、色谱填料;六、填料;六、色谱填料;六、色谱填料;六、色谱填料;六、色谱填料;六、色谱填料;正相色谱≈液固吸附色谱 正相色谱的保留机理类似于吸附过程。柱填 料为吸附剂，表面有活性吸附点。 溶剂和溶质分子可以吸附在活性中心。常用于 正相的氰基、氨基或二醇基固定相柱，吸附中 心通常为键合配体或硅烷。在使用硅胶时，吸 附位点为硅烷醇(一SiOH)。 特点：全多孔型的微球型或无定型硅胶， 球形硅胶更适合于有效分离。 用球形硅胶填充的正相柱具有较好的渗透性、 较低的操作压力和较好的稳定性。 正相色谱固定相极性强，容易把极性分子留下， 故主要用于极性样品的分离;六、色谱填料;六、色谱填料;六、色谱填料;六、色谱填料;六、色谱填料;六、色谱填料;HPLC法：以气相色谱为基础，在经典液相 色谱实验和技术基础上建立的一种液相色谱法;;紫外可见检测器（UV/VIS） 二极管阵列检测器（PDA） 示差（折光）检测器（RID） 荧光检测器（RF） 电化学检测器（L-ECD） 蒸发光散射检测器（ELSD） 质谱检测器（MS）;七、主流色谱;;数据处理器;在400℃以下的温度可以汽化(变成气体)的化合物 在汽化时不会分解的化合物 在汽化时可以分解成固定比例碎片的化合物 (热裂解 GC);;七、主流色谱;七、主流色谱;离子色谱法： 离子交换 + 高效液相色谱;七、主流色谱; 色谱流出曲线和色谱峰 峰高 峰宽、半峰宽 保留值 区域宽度 分配系数 分配比 分离度;八、色谱术语;分配系数（ partion factor） K; 一定温度下，组分的分配系数K越大，出峰越慢； 试样一定时，K主要取决于固定相性质； 每个组份在各种固定相上的分配系数K不同； 选择适宜的固定相可改善分离效果； 试样中的各组分具有不同的K值是分离的基础； 某组分的K = 0时，即不被固定相保留，最先流出。;分配比 （partion radio）D容量因子(capacity factor)；容量比(capacity factor)； ;分离度: 相邻两色谱峰保留值之差与两组分色谱峰底宽度平均值之比，用R表示。;八、色谱术语;一个样品进入之后到一个成份到达检测器的时间 (保留时间) →　多长? :定性分析 Qualitative　Analysis　　 组份的峰面积或峰的高度  →　多少? :定量分析 Quantitative　Analysis;定性分析;定量分析 ;定量的分析方法 (1)-面积百分比方法(面积归一法)-;定量分析方法 (2)–校正面积百