PCR实验室建设的规范及要求.ppt

标准PCR实验室建设——人流路径与物流路径 进入实验室区域工作人员应该按照以下路径： 公共清洁区——更衣间（更换洁净服）——缓冲间——污染实验区 工作人员退出实验室的路径为： 污染试验区——缓冲间——淋浴间（有条件的可设置）——更衣间——公共清洁区 所有的物品进入实验区必须经过传递窗，利用传递窗消毒后才可进入，实验室 内所有物品的也必须经过传递窗才可以传递到其他实验区。 一般实验室门主要向里开，但如有危险的房间，房门应朝外开； 有压差梯度的房间，门的开启方向应朝向正压方向一侧开启； 考虑到消防安全，对于那些主要逃生门的开启方向应朝向清洁区方向开启。 标准PCR实验室建设——门的开启方向 标准PCR实验室建设——基本仪器设备考虑 试剂准备区 标本制备区 扩增区 扩增产物 分析区 本区所使用的仪器设备可能有加样器、电泳仪（槽）、电转印仪、杂交炉或杂交箱、水浴箱、DNA 测序仪、酶标仪和洗板机等。 扩增区主要仪器就是核酸扩增热循环仪（PCR 仪，实时荧光或普通的）。热循环仪的电源应专用，并配备一个稳压电源或 UPS，以防止由于电压的波动对扩增测定的影响。此外， 根据工作需要，还可配备加样器、超净台等。 标本制备区仪器设备主要应有生物安全柜（ B2级），此外还应配备加样器、台式高速离心机（冷冻及常温）、台式低速离心机、恒温设备（水浴和/或干浴仪）、冰箱、混匀器和可移动紫外灯等。 试剂准备区仪器设备主要应有加样器、冰箱、天平、低速离心机、混匀器、可移动紫外灯等。可使用超净工作台作为试剂配制操作台面。 实时荧光PCR技术平台 标准PCR实验室建设——总结 1.PCR 实验室室内设计参数 区域 洁净度等级 最小换气次数（次/小时） 与室外方向上相邻相通房间最小压差(Pa) 温度（℃） 相对湿度（%） 风速（m/s） 噪声 dB（A） 试剂储存和准备区 8 12 10 18~26 40~60 ≤0.15 <60 标本制备区 8 15 8 18~26 40~60 ≤0.15 <60 扩增反应混合物配制和扩增区 8 15 -10 18~26 40~60 ≤0.15 <60 扩增产物分析区 8 15 -15 18~26 40~60 ≤0.15 <60 缓冲间 - 6 0 18~27 40~60 -- <60 PCR专用走廊 - 6 5 18~27 40~60 -- <60 2.PCR实验室要严格贯彻既有安全工作制度或安全标准操作程序，所有操作应符合国 家相关规范要求。 3.建筑布局上对PCR实验室进行合理分区。 4.严格控制各实验室房间的压力梯度，防止扩增产物污染样本。 5.设置净化空调系统和杀菌消毒装置，减少室内现存污染物对实验的影响。 PCR实验室文件体系 PCR实验室文件体系 1 2 3 PCR实验室运行体系 PCR实验室运行体系 按照文件体系工作 工作过程记录完善 实验人员专业培训 Thanks！ * * * 01 02 03 04 05 06 PCR实验室建设 PCR实验室文件体系 标准PCR实验室建设 国家法规 PCR实验概述 PCR实验室运行体系 PCR实验概述 PCR实验概述——实验目的 PCR实验是专门用来检验艾滋病、乙型肝炎、禽疫病等病毒感染性疾病的一种检测手段。 1985年美国PE-Cetus公司人类遗传研究室的Mullis等发明了具有划时代意义的PCR技术。 PCR实验概述——基本原理 PCR(Polymerase Chain Reaction)即 聚合酶链式反应，又称无细胞分子克隆系统或体外酶促基因扩增法。是基因扩增技术的一次重大革新，它可将极微量的靶 DNA 特异地扩增上百万倍。  PCR是在 DNA 聚合酶催化下，以母链 DNA 为模板以特定引物为延伸起点，通过变性、退火、延伸等步骤，体外复制出与母链模板 DNA 互补的子链 DNA 的过程。是一项 DNA 体外合成放大技术，能快速特异地在体外扩增任何目的 DNA。可用于基因分离克隆，序列分析，基因表达调控，基因多态性研究等许多方面。。 PCR实验概述——基本原理 一对合成 DNA 的引物经过高温变性、低温退火和中温延伸三个阶段为一个循环,每一次循环使特异区段的基因拷贝数放大一倍,一般样品是经过 30 次循环,最终使基因放大了数百万倍。 国家法规 国家法规 PCR实验室建设 依据：卫生部颁发的《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》（卫医发[2002]10号） 分子诊断实验室应按照《医疗机构临床基因扩增实验室管理办法》（卫医发【2010】194号）要求进行建设。分子生物实验室按照检测技术平台、检验项目和检验标本量合理分区，一般常规的分子生物实验室分为四个区，分别为试剂贮存和准备区、标本制备区、基因扩增区、扩增产