分子相互作用检测仪BIAcore使用的标准操作规程.pdf

BIAcore T200操作规程 陈俊杰 厦门大学药学院分析测试中心 2021.05.06 分子相互作用检测仪BIAcore T200 的标准操作规程 —— 内部资料，严谨转载 目录 一、基本信息 1 二、目的和适用性 1 三、主要参考依据 1 四、检测原理及适用范围 1 五、设备技术参数 2 六、实验前样品准备 3 6.1、氨基偶联法检测带游离氨基的生物分子与其他生物分子间互作 3 6.2、亲和法检测带标签的生物分子配体与其他生物分子间互作 4 6.2.1 SA-Biotin 亲和体系 4 6.2.2 NTA-6×His tag 亲和体系 4 6.2.3 Anti His-6×His tag、Anti GST-GST tag 及其他抗原抗体亲和体系 5 6.2.4 Protein A-AbFc 亲和体系 5 七、上机操作 5 7.1、系统开机 5 7.2、放置芯片 8 7.3、芯片各通道归一化处理 10 7.4、系统冲洗 13 7.5、配体偶联测试 15 7.6、配体偶联20 7.7、配体捕获测试（可选）23 7.7.1 SA-Biotin 亲和体系23 7.7.2 NTA-6×His tag 亲和体系25 7.7.3 Anti His-6×His tag、Anti GST-GST tag 及其他抗原抗体亲和体系29 7.7.4 Protein A-AbFc 亲和体系32 7.8、分析物结合测试及再生条件摸索33 7.8.1 偶联法的配体再生（也适用于 SA-Biotin 亲和捕获的配体再生）33 1 7.8.2 NTA 芯片捕获法的配体再生 36 7.8.3 基于抗原抗体（ProteinA-抗体）捕获法的配体再生36 7.9、样品检测实验36 7.9.1、基于偶联配体的单点筛选试验36 7.9.2、基于偶联配体的解离常数测定试验58 7.9.3、基于捕获配体的单点筛选试验80 7.9.4、基于捕获配体的解离常数测定试验103 7.10、不同驱动液条件摸索126 7.11、系统关机138 八、数据分析143 8.1、配体偶联或捕获结果分析143 8.1.1 原理143 8.1.2 偶联测试结果解析143 8.1.3 偶联结果解析144 8.1.4 捕获测试结果解析145 8.2 分析物样品测试及再生结果分析146 8.2.1 原理146 8.2.2 分析物样品测试结果解析146 8.2.3 再生结果解析147 8.3 样品检测结果处理148 8.3.1 原理148 8.3.2 数据分析举例150 8.4 亲和拟合与动力学拟合的选择167 8.4.1 亲和拟合适用具体示例 167 8.4.2 动力学拟合适用具体示例168 8.5 实验常见问题及条件优化169 8.5.1 配体偶联效率低下 169 8.5.2 配体捕获效率低下 169 8.5.3 分析物结合数值远低于预期170 8.5.4 分析物结合数值远高于预期170 2 8.5.5 分析物浓度设置的优化 170 8.5.6 分析物进样阶段即出现解离趋势或 “骆驼峰”171